原創|菌濃度摸不準怎么辦？

　　培養基適用性檢查是每個藥企、醫療器械企業都會遇到的，很繁瑣。但培養基企業提供的適用性報告又不能代替自己做的，很是讓人頭痛。

　　該檢查會用到多種微生物菌種，以藥企常見的TSA為例，某培養基廠家提供的檢測報告用到了7種菌。

　　藥典里沒要求這么多，但也有好幾種。這些微生物，剛從液氮或者凍干粉復融的需要預培養一代。在接種到樣品培養基和對照培養基時，需要做計數。要求接種濃度小于100cfu。這里的操作藥典一筆帶過，留給新人是一堆煩瑣事：

　　比如說我該怎么確定菌濃度？

　　在老版，應該是2005版藥典中，還有麥氏比濁管做菌濃度的指導。就是把菌懸液和麥氏比濁管做比較，大約的得出一個濃度，但現在取消了這種方法。

（麥氏比濁管已經退出藥典了，但在某寶上依然可以搜到，感興趣的可以試試。）

　　新人往往陷入一種誤區，“我要先涂平板培養，得出我的菌濃度，然后選擇合適的那個濃度來接種到樣品和對照培養基上。”想法很好，實操性很差。

　　畢竟，等你培養好了，幾天都過去了。而且藥典里還很明確的規定，“菌懸液若在室溫下放置，應在2小時內使用；若保存在2-8℃可在24小時內使用，黑曲霉孢子懸液可保存在2-8℃，在驗證過的貯存期內使用。”

　　這預示著，你的方法行不通，因為24小時內，你的菌落可能都沒冒頭。尤其是黑曲霉之類的，三天才可能剛剛形成菌落。怎么辦？應該驗證保存期限？嗯，繞進死胡同了。

　　我的“笨”辦法↓↓

　　其實完全可以這樣，我把微生物培養好后，直接取菌懸液按1:10、1:20、1:40、1:80---系列稀釋后（具體該從多少倍稀釋，完全可以根據個人經驗與喜好），每個濃度都接種到樣品培養基和對照培養基上。這樣只要有一個濃度是合適的，我的結果就可以用了。至于是其他的不適合的濃度，直接排除掉。

　　我想您應該不會從1:10：1:20系列稀釋到1:1000吧，這樣老板會氣瘋的，畢竟以TSA對照培養基為例，300ml的量為一袋，而300毫升最多可以倒20個平板。而一袋的價格已經超過七八十塊了。當然，R2A瓊脂對照培養基更貴，一袋300ml配制量，賣一百多。如果稀釋的倍數太多，導致對照培養基消耗量超過預算，我可不負責的哈。

剛剛在某寶搜了下價格，對照培養基確實不便宜。

　　我們一般選取菌落數在50-100之間的。太少了，容易有偏差。20個相差2個，和80個相差2個，比例對比差太多了，所以最終菌落數目千萬不要太少。當然，這樣做會浪費對照培養基，但考慮到多次開啟潔凈室空調及其生物安全柜的電費，還有人工時間成本，這樣做其實非常經濟實用。