有關物質Ⅰ照薄層色譜法(通則0502)試驗。臨用新制。
供試品溶液取本品細粉適量(約相當于雙氫青蒿素g),置25ml具塞錐形瓶中,精密加二氯甲烷10ml,振搖使溶解,離心,取上清液用0.45μm濾膜濾過,取續濾液。對照溶液(1)精密量取供試品溶液1.5ml,置50m量瓶中,用二氯甲烷稀釋至刻度對照溶液(2)精密量取對照溶液(1)5ml,置100m量瓶中,用二氯甲烷稀釋至刻度。系統適用性溶液取雙氫青蒿素對照品與青蒿素對照品各適量,加二氯甲烷溶解并稀釋制成每1ml中約含雙氫青蒿素20mg與青蒿素0.1mg的混合溶液色譜條件采用硅膠G薄層板,以甲苯丙酮-冰醋酸(90:10:2)為展開劑測定法吸取上述四種溶液各101,分別點于同一薄層板上,展開15cm以上,取出,晾干,噴以2%香草醛的硫酸乙醇溶液,在85℃加熱10~20分鐘至斑點顯色清晰系統適用性要求系統適用性溶液中,雙氫青蒿素與青蒿素應顯清晰分離的斑點,對照溶液(2)應顯單一清晰斑點限度供試品溶液如顯雜質斑點,不得多于2個;其中與對照溶液(1)主斑點顏色相同的雜質斑點,不得多于1個,且與對照溶液(1)的主斑點比較,不得更深(3.0%)。有關物質Ⅱ照高效液相色譜法(通則0512)測定。避光操作供試品溶液取本品的細粉適量(約相當于磷酸哌喹50mg),置100ml量瓶中,加流動相溶解并稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續濾液。對照溶液精密量取供試品溶液3ml,置100ml1量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻。
色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈0.1%三氯乙酸溶液-磷酸(20:80:0.035)為流動相;檢測波長為349nm;進樣體積20pl系統適用性要求理論板數按磷酸哌喹峰計算不低測定法精密量取供試品溶液與對照溶液,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍。限度供試品溶液色譜圖中如有雜質峰,各雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積(3.0%)溶出度照溶出度與釋放度測定法(通則0931第二法)測定溶出條件以鹽酸溶液(9→1000)500m為溶出介質,轉速為每分鐘75轉,依法操作,經45分鐘時取樣。雙氫青蒿素供試品溶液取溶出液適量,濾過,取續濾液。對照品溶液取雙氫青蒿素對照品適量,精密稱定,加乙醇溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.4mg的溶液,搖勻,精密量取2ml,置10m量瓶中,用溶出介質稀釋至刻度,于37℃保溫45分鐘,放冷。
色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以0.02mol/L磷酸氫二鈉溶液(用磷酸調節pH值至2.4)-乙腈(65:35)為流動相;檢測波長為237nm;進樣體積20l系統適用性要求理論板數按雙氫青蒿素峰計算不低于3000,雙氫青蒿素兩峰之間的分離度應大于2.0。測定法分別精密量取供試品溶液與對照品溶液各5ml,置25ml量瓶中,用3.6%氫氧化鈉溶液稀釋至刻度,搖勻,置60℃水浴中反應30分鐘,取出,放冷,精密加磷酸0.7ml,播勻,用0.45μm濾膜濾過,取續濾液。
照高效液相色譜法(通則0512),在2小時內分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖,按外標法以雙氫青蒿素兩峰面積的和計算每片的溶出量。 限度標示量的70%,應符合規定。
磷酸哌喹供試品溶液取溶出液適量,濾過,精密量取續濾液1ml,置50ml量瓶中,用溶出介質稀釋至刻度,搖勻。對照品溶液取磷酸哌喹對照品適量,精密稱定,加溶出介質溶解并定量稀釋制成每1ml中約含12.8g的溶液。
測定法取供試品溶液與對照品溶液,照紫外-可見分光光度法(通則0401),在345nm的波長處分別測定吸光度,計算每片的溶出量限度標示量的80%,應符合規定。其他應符合片劑項下有關的各項規定(通則0101)