在反相鍵合相色譜儀中， C18是常用的鍵合固定相，水是常用的流動相弱組分，重要的是選擇流動相的強組分，常用的強組分有甲醇、乙腈和四氫呋喃。反相鍵合相色譜儀流動相的選擇規則如下：
一、若樣品中含有兩個以下氫鍵作用基團（如－COOH、－NH2和－OH等）的芳香烴鄰、對位或鄰、間位異構體，可選用甲醇－水為流動相。
二、若樣品中含有兩個以上Cl、I、Br鄰、間、對位異構體或極性取代基的間、對位異構體以及雙鍵位置不同的異構體，可選用乙腈－水為流動相。
三、當樣品的 k′＞30（一般要求1＜k′＜20）時，應在甲醇－水流動相中加入適量四氫呋喃、氯仿或丙酮，使樣品的k′值保持在適當范圍內，也可以通過減少固定相表面鍵合碳鏈濃度或縮短碳鏈長度來減小k′值。
四、若樣品中含有－NH2這類基團時，應在流動相中加入適量有機胺添加劑，以提高樣品保留值的重現性和色譜峰的對稱性。