1. 工作溶液
1.1.1 溶液 A 30％ 丙烯酰胺，0.8％ 雙丙烯酰胺
1.1.1 溶液 B 15 mol/L Tris-HCl（pH 8.8），0.4％ SDS
1.1.3 溶液 C 0.5 mol/L Tris-HCl（pH 6.8），0.4％ SDS
2. 5％～20％ 分離膠所需的溶液量 
3. 制備分離膠 灌制丙烯酰胺梯度膠與線性膠最大的區別在于需要使用梯度儀。恰好在分離膠溶液灌入凝膠模具之前，梯度儀將高濃度和低濃度的丙烯酰胺溶液相混合，在沒有蠕動泵的情況下，凝膠溶液依靠重力灌入模具內。高濃度丙烯酰胺溶液內加入蔗糖可以穩定梯度的形成。
3.1 準備好凝膠模具，并裝配好梯度混合器。磁力攪拌器置于梯度混合器的下方，這樣就不會使混合器的凝膠槽內產熱。調節蠕動泵至流速為 3 ml/min；
3.2 準備好未加 TEMED 的分離膠溶液；
3.3 將 TEMED 加至分離膠溶液內，輕輕攪拌混勻，此時動作要迅速，因為凝膠很快會聚合；
3.4 將適量的兩種分離膠溶液分別加人到混合器的兩個凝膠槽中（例：對于 10 ml 的凝膠，各加 5 ml 至每個槽屮高百分比濃度的丙烯酰胺溶液應加入至 B 槽中；
3.5 打開磁力攪拌器，接通兩個槽之間的連通管；
3.6 打開蠕動泵，形成梯度膠；
3.7 當分離膠灌完后，在膠的頂部輕輕覆蓋約 1～5 mm 的水層；
3.8 用清水沖洗梯度混合器和連接管，防止殘留的丙烯酰胺聚合后堵塞；
3.9 堆積膠的制備。（參見SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳） 展開 | 
