只養雌鰻魚又不遺留激素？質譜分析專家出了一招

　　分析測試百科網訊 當我們從超市里買來一尾又肥又大的鰻魚時，不會想象到，年輕時，它其實游動在入海口，并且連性別都沒有確定。現代科學技術確保它在上餐桌前經歷了一系列復雜的過程。

　　商業養殖鰻魚，首先要從入海口處撈出性別還沒有確定的“年輕的鰻魚”（young eels），又叫“玻璃鰻魚”（glass eels）或鰻線，然后在人工養殖池中養大。因為人工養殖環境中，鰻魚的密度過大，使得這些玻璃鰻魚中的大部分會發展成為雄性。

鰻魚

　　但是，雌性鰻魚的個頭能長得更大，更具商業價值。于是，養殖者會加入含有雌激素，如17β-雌二醇的飼料，以確保其雌性化。但是，我們還要注意，這些加入的雌激素只需要保證鰻魚成為雌性，而不是遺留下來，和鰻魚一起送上餐桌。所以養殖鰻魚中的雌激素水平必須準確監測，以確保當鰻魚進入人類食物鏈時，沒有多余的激素存在。

　　類固醇激素一般通過免疫測定，LC-MS或GC-MS檢測（后一種檢測方法通常需要衍生化）。加拿大科學家決定把LC-MS/MS與差示離子遷移譜（DMS）結合起來使用。后一種技術發生在HPLC和MS系統之間。這種技術使用ESI源產生離子，然后根據離子在電場中不同的遷移率將它們分離。

　　LC-MS/MS與DMS組合用于類固醇激素檢測

　　研究人員檢測了美國鰻魚樣品中的三種類固醇激素：添加到飼料中的17β-雌二醇，以及相關化合物雌酮和雌三醇。這三種化合物在一定程度上天然存在于魚類中。在不同時間點采集魚進行肌肉組織取樣，并捕獲野生雌性鰻魚進行抽樣。將肌肉樣品勻漿，然后用乙腈在超聲處理下萃取。

　　使用裝有Phenomenex Luna3μmC18柱的賽默飛Ultimate 3000 RSLCnano色譜儀和含有0.05％氫氧化銨的乙腈和水梯度洗脫進行HPLC分析。將SCIEX SelexION源用于差示離子遷移率（DMS），以異丙醇作為改性劑（即為了提高選擇性而引入到離子遷移源中的揮發性物質）。在這種情況下，為了通過DMS分離類固醇離子，需要使用改性劑和仔細調整DMS參數。最后，使用SCIEX QTRAP? 5500 LC/MS/MS 系統進行MS/MS。優化選擇性反應監測以給出感興趣的三種類固醇的特異性轉換。

　　 總的來說，LC-MS/MS與DMS組合可得到很好的分離效果，但應注意的是，三種主要的化合物可以在最佳條件下通過HPLC單獨分離。打開DMS有助于提供更清晰的光譜。該系統用于測量在補充劑從其飲食中撤出后鰻肌中17β-雌二醇的下降。發現有關類固醇在撤離后第5天達到了背景水平，與未經處理的養殖鰻魚相同。最終水平比野生雌魚發現的水平要低一些。在最后一次喂食17β-雌二醇之后，僅觀察到雌激素達到較低水平，而沒有檢測到雌三醇。

　　DMS增強了LC-MS/MS，但值得嗎？

　　LC-MS/MS與DMS的組合可成功應用于鰻魚激素的監測。結果清楚地表明，加入17β-雌二醇的雌性化鰻魚沒有產生任何長期積累的雌激素。然而，盡管DMS有助于提供更清晰的光譜，但仍未實現適當的分離。雖然這種技術無疑可顯著提高一些復雜分析的性能，但目前尚不清楚一些實驗室是否會考慮將DMS系統的額外費用用于類固醇分析。