一、血培養檢測 采血指征：對入院的危重患者未進行系統性抗生素治療前，應及時進行血液培養，患者出現以下體征時可作為采集血培養的重要指征：
1． 發熱（≥38℃）或低溫（≤36℃）。
2． 寒戰。
3． 白細胞增多（>10×10 9/L，特別有“核左移”未成熟的或帶狀的白細胞增多。
4． 粒細胞減少（成熟的多核白細胞<1×10 9/L）。
5． 血小板減少。
6． 皮膚粘膜出血。
7． 昏迷。
8． 多器官衰竭。
或同時具備上述幾種體征時應采血培養。在評估可疑新生兒敗血癥時，除發熱或低燒外，很少培養出細菌，應該補充尿液和腦脊液培養。肺炎鏈球菌與流感嗜血桿菌菌血癥的患兒（特別是2歲以下的幼兒）一般多見于門診，常伴有明顯發熱（≥38.5℃）和白細胞增多（≥20×109/L）。老年菌血癥患者，可能不發熱或不低熱，如伴有身體不適，肌痛或中風可能是感染性心內膜炎的重要指征。
血培養檢測 皮膚消毒程序：
血培養為防止皮膚寄生菌污染，可使用消毒劑（碘酊或碘伏）對皮膚進行嚴格仔細的消毒處理，最大限度地減低皮膚污染。感染性心內膜炎，特別是心臟瓣膜修復術的感染，可能由皮膚寄生的微生物引起（例如：表皮葡萄球菌或棒桿菌屬）。因此，在采集過程中血培養的污染一定要減小至最低程度。用做培養的血液均不應該在靜脈或動脈的導管中抽取，除非靜脈穿刺無法得到血液或用來評價與導管感染相關性指標。如果抽取了導管血，也應同時在其他部位穿刺獲取非導管內靜脈血液進行血培養。
皮膚消毒嚴格按以下步驟進行：
1． 首先用70%酒精擦拭靜脈穿刺部位待30秒鐘以上。
2． 然后用一根碘酊或碘伏棉簽消毒皮膚（1%-2%碘酊30秒或10%碘伏消毒60秒），從穿刺點向外以1.5cm~2cm直徑畫圈進行消毒。
3． 最后用70%酒精脫碘。
嚴格執行三步消毒后，可行靜脈穿刺采血。注意對碘過敏的患者，只能用70%酒精消毒，消毒60秒鐘，待穿刺部位酒精揮發干燥后穿刺采血。
血培養檢測 培養瓶消毒程序：
1． 用70%酒精或碘溶液（不要使用碘）消毒血培養瓶橡皮塞子。
2． 酒精作用待60秒。
3． 在血液注入血培養瓶之前，用無菌紗布清除橡皮塞子表面剩余的酒精，然后注入血液。
要點：血培養的關鍵是防止皮膚寄生菌或環境引起的污染，由污染菌引起的假陽性增加了患者抗生素的使用量，延長了住院日，延誤病情診斷并增加了經濟負擔等。然而，在理想的消毒條件下，仍有3%~5%血培養中混有污染菌，它們來源于皮膚（表皮葡萄球菌，痤瘡丙酸桿菌，梭桿菌屬，類白喉群）或來源于環境（革蘭陽性芽孢桿菌屬，不動桿菌屬），這些微生物有時有致病作用。對兩次不同部位血培養生長同一種微生物，不同類無菌部位標本培養中生長同一種微生物，微生物快速生長（48h內）。上述情況下，應考慮是真正的感染。臨床實驗室工作人員和醫生之間應經常討論血培養結果，建立良好的交流關系對各方面都有益處。例如查病例回顧性調查分析：1995~1999年血中分離的70例凝固酶陰性葡萄球菌，入院48h內檢出者，39.3%（24例）為污染菌，48h后檢出者（9例）100%為污染菌，污染菌檢出時間顯著長于病原菌。提示血培養中凝固酶陰性葡萄球菌污染率較高。因此，采血前嚴格執行皮膚消毒程序非常重要。
血培養檢測 采血量：
對從菌血癥或真菌菌血癥患者血培養中獲得微生物，每個培養瓶抽取的血量是唯一重要的變量。當培養的血量從2ml增加到20ml時，血培養的陽性率增加30%~50%，因為培養的血液量增加1ml，陽性率增加3%~5%。
用靜脈穿刺獲得的血量，成人和兒童不同。兒童，特別是新生兒很難獲得大量的血液，對嬰幼兒和兒童，一般靜脈采血1ml~5ml用于血培養，當細菌濃度足夠高時，血液少于1ml也足以檢測菌血癥。標本量大于1ml，細菌量也增加，對于感染的兒童沒毫升血液比成人有更多的微生物。對于成人血培養的標本量少于10 ml不易培養出細菌，每瓶最低限量應是10ml血液，20ml~30ml最合適，血液和肉湯的比一般推薦為1:5至1:10。幾乎所有現代的血培養系統假如血液量均在10ml以上。雖然靜脈采血30ml可增加細菌量，但這不太切合實際，這很容易造成醫院獲得性貧血。
血培養的數量和采血時間：
血培養的數量和采血時間關系到菌血癥的病理生理學，一次靜脈采血注入到多個培養瓶中應視為單次血培養。研究已經證實，采集適量的血液注入2~3瓶血培養瓶中足以檢測所有的菌血癥和真菌菌血癥。對間歇性菌血癥，用于培養的血液應在估計寒戰或體溫高峰到來之前采集，因為細菌流入血液與寒戰發作通常間隔1h，在發燒時血液可能沒有細菌，實際上，血培養通常是在寒戰或發燒后進行。由于細菌很快會從血液中清除，因此，在寒戰或發燒后應盡快抽取血培養。正是由于這個原因，我們一般不推薦在任意時間抽取靜脈血進行培養，研究資料表明任意時間采血并不能提高微生物的檢出率。實際上已經證明在24h內同一時間或任意時間抽血培養發現微生物的結果相似。無論何時，采集血培養應該在使用抗生素之前進行，推薦同時采集2~3瓶，每瓶20ml~30ml血樣進行培養來做最初的平谷，這也更切合實際。先前餓抗生素治療可能導致血培養結果陰性，微生物延遲生長更為常見。
有研究證實，對鏈球菌心內膜炎患者，在做血培養的前兩周內患者接受了抗生素治療，血培養的陽性率從97%下降到91%。由于有很好的血培養技術，對感染性心內膜炎患者血培養的陽性率應該達到95%以上。
對特殊的全身性和局部感染患者采集血培養的建議：
1． 懷疑記性原發性菌血癥、真菌菌血癥、腦膜炎、骨髓炎、關節炎或肺炎的患者：應立即采集2或3份血培養瓶，快速進行血培養。
2． 不明病源的發熱，如隱性膿腫，傷寒熱和波浪熱：發熱開始采集2或3份血培養。24h至36h后，估計溫度升高之前（通常在下午）立即采集2份以上血培養。
3． 懷疑菌血癥或真菌菌血癥，血培養結果持續陰性，應改變學培養方法，以便獲得罕見的或苛養的微生物。
4． 感染性心內膜炎，對急性心內膜炎患者1h（2h內）采集3份血培養，如果所有結果24h后陰性，再采集3份血培養瓶。入院前兩周內接受抗生素治療的患者，連續三天采集血培養，每天2份。
要點：大部分臨床醫生對成年患者采集血量不足，采集血培養份數不夠，采血時機不合適，通常在患者體溫高熱時，24h內采集一瓶血培養，降低了血培養的陽性率，不符合才學的基本規程，實驗室應該做大量宣傳溝通工作。
血培養檢測 運輸標準：
采血后血培養瓶或采集管應立即送到臨床微生物實驗室。血培養瓶和采集管短期內置于室溫不影響細菌檢出，不要冷藏，如果血培養瓶在送往實驗室培養或自動化儀器檢測之前不得已需放置一段時間，應置于35℃~37℃孵箱中。但含血液的采集管不應置于孵箱中，若有細菌生長會釋放出一些氣體，采集管有破裂或滲漏的危險。實驗室收到血培養瓶后立即進行肉眼觀察微生物生長情況。
采用自動化連續檢測血培養系統，有一點很讓人憂慮，那就是標本運送有時被延誤，這樣會導致微生物檢測延遲（盡管微生物生長不受影響），目前很少有人注重這一點。盡管自動化連續檢測系統有允許延遲上瓶檢測微生物生長的原理，培養瓶在運送過程中還應盡量減少延遲。
血培養檢測 接受標準：
實驗室收到血培養后，應按以下步驟操作：
1． 檢查培養瓶確保它們被安全地放置。
2． 用肉眼觀查微生物生長的情況，注意血液層上面是否有絮狀沉淀、均勻的或表面下的渾濁、溶血、液體培養基凝固、有一層表面薄膜、產生氣體、血層表面或深層有白色顆粒等，如有上述情況產生提示有微生物生長。
3． 檢查瓶子上的標簽，確認資料是否齊全，與申請單上的患者資料是否一致。
4． 保證獲得適量的血液。
5． 檢查血液是否超過要求的基線。
6． 放置在孵箱中或上機進行檢測。
由于菌血癥和真菌菌血癥的檢測對臨床感染性基本的診斷十分重要，實驗室工作人員應認真接收血標本，對兒童和承認，不管抽血量多少，均應該進行培養并在報告單上注明血量，有可能延誤菌血癥或真菌菌血癥的檢測。
血培養檢測 不規范處理方法：
送到實驗室的血標本應認真處理，減少標本錯誤和標本污染。標本處理不當及不正確采集，醫院及實驗室工作人員本身攜帶的病菌均可能造成標本污染。因此，建議發生下列不規范的血培養時應該及時處理。
1. 血培養或培養管無標簽或貼錯標簽、培養瓶或培養管有滲漏、破裂或明顯的污染、血標本采集后放置12h以上、用不適當的培養瓶或培養管收集標本。
處理方法：立即與臨床醫師聯系，報告：“標本不規范的具體理由”。
2. 用失效的培養瓶或培養管收集標本。]
處理方法：與醫生聯系，報告：“用過期培養瓶收集血標本，請用效期內的培養瓶收集標本并送檢。
3. 送交血標本的量不足或只送一瓶血培養。
處理方法：與醫生聯系，報告：“送交的血培養標本量不足，請補送足量血液培養瓶”。
4. 未送推薦的培養瓶數或類型
處理方法：與醫生聯系，報告：如“只送需氧瓶不符合規程，血培養的基本規程推薦送兩種培養瓶：需氧瓶和厭氧瓶”。
要點：每位臨床醫師都應該對患者負責任，實驗室工作人員發現不規范的血標本后，應該即使同志臨床醫生以便重復采集血培養進行補救。
血培養檢測 微生物室處理血培養預防感染的安全程序：
1． 細菌室工作人員，在所有的血培養處理過程中都應戴乳膠手套。
2． 拒收不符合安全標準的血培養瓶或培養管。
3． 在生物安全柜內打開或穿刺培養瓶或家一個膠膜防護裝置（如：把培養瓶置于丙烯酸酯膜后或戴上口面罩）。
4． 在生物安全柜內操作肉眼觀察有微生物生長跡象的培養瓶。
5． 操作產生的氣溶膠，可能含有高濃度的致病菌或真菌，利用實驗室的方法和技術采取正確的自我保護措施。
6． 用于培養基的塞子和膠帶可能含有高濃度的致病菌，應防止接觸。
7． 正確處理與血培養有關的污染物。
8． 立即報告血培養結果及抗生素敏感試驗結果。
血培養檢測——陽性結果的處理：
傳統手工法血培養應該每天至少檢查一次，對48h~72h未生長的培養瓶至少應進行需氧傳種培養一次。對培養瓶進行肉眼檢查，注意下列幾點提示有微生物生長：
1． 血與肉湯混合物出現渾濁。
2． 在血液層上有絮狀沉淀，某些鏈球菌在沉積的紅細胞表面上，會有小的“棉球樣”生長。
3． 肉湯內出現渾濁生長。
4． 肉湯表面有薄膜生長。
5． 出現溶血。
6． 產生氣體，許多發酵菌可產氣，梭菌屬會產生大量的氣體，出現明顯的溶血現象。
7． 血液層表面或深層有白色顆粒。
8． 液體培養基凝固。
如果懷疑血培養陽性，應立即進行革蘭染色，以無菌手續從培養瓶中取肉湯2~3滴涂片，自然干燥，加熱固定并染色。染色結果應盡快報告，如革蘭陽性球菌為成對或成堆或成鏈，革蘭陰性桿菌為小桿菌或球桿菌等。革蘭染色結果可指導醫生為患者經驗選擇抗生素治療，并作為實驗室進行細菌鑒定補充試驗的參考依據，它對于鑒別葡萄球菌和鏈球菌非常有用。如果血培養陽性革蘭染色未發現細菌，應做吖啶橙染色進行二次鏡檢，這對檢測彎曲菌菌血癥和布魯菌菌血癥很有幫助，而革蘭染色很少發現這些細菌。依據細菌革蘭染色形態特點，選擇適當的培養基傳種，見表1。
表1。 血培養陽性后根據革蘭染色特點應傳種培養基種類的建議
染色特點 5%~10%CO2孵育 厭氧氣體孵育a
血瓊脂 巧克力瓊脂 中國蘭或麥康凱或EMB 血瓊脂 PEA或CAN
革蘭陽性
球菌 × × ×
桿菌 × × ×
革蘭陰性
球菌 × × × ×
桿菌 × × × × ×
真菌b × ×
持續檢測陽性 × × ×
革蘭染色陰性c
ａ所有培養至少至48h；EMB；伊紅美藍瓊脂；PEA；苯乙基醇瓊脂；CAN；多粘菌素-萘啶酮酸瓊脂。
ｂ增加真菌培養基（如：沙保弱葡萄糖瓊脂）和30℃培養。
ｃ接種硫羥乙酸鹽肉湯中。
當革蘭染色顯示細菌形態均一時，厭氧培養的價值不大。對所有培養陽性，革蘭染色陰性的血培養瓶，再次上機檢測之前都應傳種厭氧和需氧培養皿。
革蘭染色為純的細菌，可進行初步鑒定并做直接抗生素藥敏試驗的標準程序，而且沒有經FDA批準的市售產品。可用于初步鑒定的商品試劑，包括：膽汁溶解，DNA酶，乳膠凝集分型實驗等。
美國臨床實驗室標準化委員會（NCCLS）推薦的抗生素敏感試驗沒有血培養直接敏感試驗法。然而，許多學者提出：根據革蘭染色初步分析鑒定，可以靈活地選擇抗生素進行直接抗生素藥敏試驗。
對各種血培養法中的陽性肉湯培養物進行傳種并且立即孵育培養，為進一步試驗用，傳種5h-7h后有明顯的菌落生長，取瓊脂表面的菌落用于細菌鑒定和抗生素敏感試驗。使用含固體培養基的血培養系統，如：雙相法，有菌落生長可直接進行細菌鑒定和標準的抗生素敏感試驗。
盡管現在使用探針雜交和DNA擴增技術可以鑒定血培養中的細菌和檢測抗生素敏感性，但這種技術不實用，價格昂貴，FDA不推薦常規使用。
血培養分離的細菌，萬一需要進一步的研究，至少保存幾個星期。為了讓細菌活著，兼性需氧菌和兼性厭氧菌應傳種到半固體培養基中，例如動力培養基。嚴格厭氧菌應保存到無葡萄糖的肉湯培養基或冷凍在兔血或脫脂牛奶培養基中。柯養菌可以接種到巧克力瓊脂斜面上并用礦物油封存。為長期儲存，細菌可懸浮于15%甘油肉湯中并-70℃冷凍。
血培養陽性結果的報告程序：
血培養陽性結果十分重要，應立即口頭報告給患者的主治醫生，報告的日期和時間以及接受報告人的姓名應記錄在患者的報告單上。應向臨床醫師提供重要的信息，包括革蘭染色的形態，血培養陽性的數量和其他的鑒定資料，如革蘭陽性球菌可疑為葡萄球菌。處理報告之前，應回顧一下患者近期標本的培養情況，這些結果有助于解釋感染微生物來源。口頭報告后應立即進行書面初步報告。除非初步報告有錯誤或新發現可改變患者的治療方案，否則不應更改初步報告的結果。
當培養24h和48h后，對陰性血培養結果在最短的時間內發出初步報告。有些實驗室以培養的時間長短發初步報告，例如：“血培養3天后無細菌生長”。
血培養檢測 真菌培養：
多種方法可提高血液中真菌的檢出率，包括使用通氣的真空血培養瓶、雙相培養基、裂解-離心技術和特殊營養的肉湯培養基（如腦心侵液肉湯等）。裂解-離心技術是一種分離真菌的有效方法，特別是對于營養要求可可的雙相真菌。實際上，大多數需氧的血培養瓶（通常孵育5至7天）可提供充足的營養支持白色念珠菌的生長。然而對于其他念珠菌屬、光滑球擬酵母菌、新型隱球菌、莢膜組織胞漿菌和其他雙相真菌，使用裂解-離心技術可獲得最高的檢出率。霉菌抑制瓊脂、腦心侵液瓊脂和巧克力瓊脂通常與lsolator管結合使用。對于分離糠秕鱗斑霉，可在培養基表面覆蓋一層橄欖油或其他長鏈脂肪酸。陰性的真菌血培養應于22-30℃孵育4周后再仍棄。