葉綠體色素（chloroplastpigment）的提取分離和理化性質

一、葉綠體色素的提取與分離

【原理】

葉綠體中含有綠色素（包括葉綠素a和葉綠素b）和黃色素（包括胡蘿卜素和葉黃素）兩大類。它們與類囊體膜上的蛋白質相結合，而成為色素蛋白復合體，這兩類色素都不溶于水，而溶于有機溶劑，故可用乙醇或丙酮等有機溶劑提取。提取液可用色層分析的原理加以分離。因吸附劑對不同物質的吸附力不同，當用適當的溶劑推動時，混合物中各成分在兩相（流動相和固定相）間具有不同的分配系數，所以它們的移動速度不同，經過一定時間層析后，便將混合色素分離。

【儀器與用具】

研缽2套；漏斗；100ml三角瓶；玻璃棒；剪刀；滴管；培養皿（直徑11cm）；康維皿或平底短玻管（也可用塑料藥瓶蓋代替）；藥勺；圓形濾紙（直徑11cm）；濾紙條（5cm×1.5cm）。

【試劑】

95%乙醇；石英砂；碳酸鈣粉；

推動劑：按石油醚︰丙酮︰苯（10︰2︰1）比例配制（體積比）。

【方法】

1．葉綠體色素的提取

（1）取菠菜或其他植物新鮮葉片4～5片（2g左右），洗凈，擦干，去掉中脈剪碎，放入研缽中。

（2）研缽中加入少量石英砂及碳酸鈣粉，加2～3ml 95%乙醇，研磨至糊狀，再加10～15ml 95%乙醇，提取3～5min，上清液過濾于三角瓶中，殘渣用10ml 95%乙醇沖洗，一同過濾于三角瓶中。

如無新鮮葉片，也可用事先制好的葉干粉提取。取新鮮葉片（以菠菜葉最好），先用105℃殺青，再在80℃下烘干，研成粉末，密閉貯存。用時稱葉粉1g放入小燒杯中，加95%乙醇20～30ml浸提，并隨時攪動。待乙醇呈深綠色時，濾出浸提液備用。

（3）另取一研缽，放入剪碎的新鮮葉片，放入少量石英砂（不加碳酸鈣粉），用水研磨。先加2ml蒸餾水，研至糊狀，再加蒸餾水30ml，攪均，不過濾。

2．葉綠體色素的分離

（1）取圓形定性濾紙一張（直徑11cm），在其中心戳一圓形小孔（直徑約3mm）。另取一張濾紙條（5cm×1.5cm），用滴管吸取乙醇葉綠體色素提取液沿紙條的長度方向涂在紙條的一邊，使色素擴散的寬度限制在0.5cm以內，風干后，再重復操作數次，然后沿長度方向卷成紙捻，使浸過葉綠體色素溶液的一側恰在紙捻的一端。

（2）將紙捻帶有色素的一端插入圓形濾紙的小孔中，使與濾紙剛剛平齊（勿凸出）。

（3）在培養皿內放一康維皿，在康維皿中央小室中加入適量的推動劑，把帶有紙捻的圓形濾紙平放在康維皿上，使紙捻下端浸入推動劑中。迅速蓋好培養皿。此時，推動劑借毛細管引力順紙捻擴散至圓形濾紙上，并把葉綠體色素向四周推動，不久即可看到各種色素的同心圓環。