吞噬功能實驗在生物體內發揮著重要作用(1)對機體的非特異性免疫功能的檢測;(2)對吞噬細胞活性和聚集能力的測定。
| 實驗方法原理 | 中性粒細胞(polymorphonuclear leukocyte,PMN)的功能包括粘附、移動、吞噬殺菌等,是機體天然免疫力的重要組成部分。吞噬細胞具有對異物(細菌、綿羊紅細胞、雞紅細胞等)吞噬和消化的功能,在機體非特異性免疫中發揮重要作用。 |
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| 實驗材料 | 中性粒細胞 |
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| 試劑、試劑盒 | NBT鹽水PBS硝基藍四氮唑肝素甲醇沙黃水 |
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| 儀器、耗材 | 試管毛細滴管玻片培養箱顯微鏡 |
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| 實驗步驟 | 一、試管法 肝素抗凝血0.1 ml 滴于小試管底部,再加入等量NBT應用液 ↓ 37℃,30分鐘(中間搖動一次),再置室溫15分鐘 ↓ 搖勻,用毛細管取一滴放于玻片一端,做血涂片 ↓ 立即用電吹風吹干,甲醇溶液固定1分鐘,10 g/L 沙黃水溶液染色5分鐘 ↓ PBS沖洗、自然干燥、油鏡檢測 二、微量法 取硅油處理的1 mm x 75 mm 的毛細管取末梢血至30 mm 處 ↓ 立即吹入硅油處理的凹玻片中,與1/30量的0.05%肝素溶液混合 ↓ 加等量的1 g/L NBT,輕輕搖動混合,濕盒內,37℃,室溫15分鐘 ↓ 用毛細管吸去表層上清液,用硅油處理的毛細管吹數次混勻 ↓ 吸出少許制成血片,空氣干燥,沙黃水溶液染色,油鏡觀察 三、結果
1. 血片中有10%以上的中性粒細胞的胞質中有藍紫或藍黑顆粒沉著,其沉著顆粒形狀大小不一,有的呈大塊狀,有的呈點狀或放射狀。 展開 |
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| 注意事項 | 1. NBT配制一定要完全溶解,濾液要呈透明的淡黃色,儲存于棕色瓶中;
2. NBT應用液應于用前配制;
3. 血涂片要求推出尾部,不可過厚或過薄。血液與NBT要充分混合,保溫時間不能過長;
4. 細胞涂片要輕,以免推破巨噬細胞。涂片不可過厚或過薄,以免影響觀察結果。
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