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  • 發布時間:2019-04-06 21:54 原文鏈接: 吞噬功能實驗_中性粒細胞吞噬功能測定

    吞噬功能實驗在生物體內發揮著重要作用(1)對機體的非特異性免疫功能的檢測;(2)對吞噬細胞活性和聚集能力的測定。

    實驗方法原理中性粒細胞(polymorphonuclear leukocyte,PMN)的功能包括粘附、移動、吞噬殺菌等,是機體天然免疫力的重要組成部分。吞噬細胞具有對異物(細菌、綿羊紅細胞、雞紅細胞等)吞噬和消化的功能,在機體非特異性免疫中發揮重要作用。      
    實驗材料

    中性粒細胞

    試劑、試劑盒

    NBT鹽水PBS硝基藍四氮唑肝素甲醇沙黃水

    儀器、耗材

    試管毛細滴管玻片培養箱顯微鏡

    實驗步驟

    一、試管法

     

    肝素抗凝血0.1 ml 滴于小試管底部,再加入等量NBT應用液


    37℃,30分鐘(中間搖動一次),再置室溫15分鐘

    搖勻,用毛細管取一滴放于玻片一端,做血涂片


    立即用電吹風吹干,甲醇溶液固定1分鐘,10 g/L 沙黃水溶液染色5分鐘

    PBS沖洗、自然干燥、油鏡檢測

     

    二、微量法

     

    取硅油處理的1 mm x 75 mm 的毛細管取末梢血至30 mm 處

    立即吹入硅油處理的凹玻片中,與1/30量的0.05%肝素溶液混合

    加等量的1 g/L NBT,輕輕搖動混合,濕盒內,37℃,室溫15分鐘

    用毛細管吸去表層上清液,用硅油處理的毛細管吹數次混勻

    吸出少許制成血片,空氣干燥,沙黃水溶液染色,油鏡觀察

     

    三、結果

    1.  血片中有10%以上的中性粒細胞的胞質中有藍紫或藍黑顆粒沉著,其沉著顆粒形狀大小不一,有的呈大塊狀,有的呈點狀或放射狀。

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    注意事項

    1. NBT配制一定要完全溶解,濾液要呈透明的淡黃色,儲存于棕色瓶中;


    2. NBT應用液應于用前配制;


    3. 血涂片要求推出尾部,不可過厚或過薄。血液與NBT要充分混合,保溫時間不能過長;


    4. 細胞涂片要輕,以免推破巨噬細胞。涂片不可過厚或過薄,以免影響觀察結果。


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