含有目的基因真核表達pEGFPC1載體的構建實驗

實驗方法原理	轉化過程所用的受體細胞一般是限制修飾系統缺陷的變異株，即不含限制性內切酶和甲基化酶的突變體（Rˉ，Mˉ），它可以容忍外源DNA分子進入體內并穩定地遺傳給后代。受體細胞經過一些特殊方法（如電擊法，CaCl₂）處理后，細胞膜的通透性發生了暫時性的改變，成為能允許外源DNA分子進入的感受態細胞（Competentcells）。進入受體細胞的DNA分子通過復制，表達實現遺傳信息的轉移，使受體細胞出現新的遺傳性狀。將經過轉化后的細胞在篩選培養基中培養，即可篩選出轉化子（Transformant），即帶有異源DNA分子的受體細胞）。
實驗材料	重組質粒
試劑、試劑盒	SOC液體培養基 LB 液體培養基 JM109 DH5 α Amp Kan
儀器、耗材	LB平板
實驗步驟	1. 100 ul感受態細胞在冰中融化。 2. 分裝2管，50 ul/管。 3. 加入轉化的DNA Xul。 4. 冰中放置30 min。 5. 42 ℃放置90 sec。 6. 冰中放置2～3 min。 7. 加入4倍體積的SOC液體培養基或LB液體培養基。 8. 37 ℃振蕩培養1 hrs。 9. 涂平板，37 ℃溫箱培養12～16 hrs。展開
注意事項	1. 加入DNA的量要小于10 ng，DNA的量過高影響轉化效率。 2. SOC培養基可以用LB培養基替代，但是轉化率低于使用SOC培養基。 3. 熱激溫度42 ℃一定要準確，否則影響轉化效率。