含有目的基因真核表達pEGFPC1載體的構建實驗

實驗方法原理	以DNA為模板，在4種核苷酸存在的條件下，借助DNA聚合酶作用出現的酶促合成，依賴于在加熱條件下，雙鏈DNA解離成單鏈（變性），降溫（復性），使引物與單鏈特異性結合，同時使4種核苷酸在DNA聚合酶的作用下，發生以引物為起點進行聚合的現象，使DNA鏈不斷延伸，PCR反應進行。反應步驟包括：變性（常規采用94℃高溫條件下使待擴增的模板DNA氫鍵斷裂，解鏈成為單鏈模板）、退火（人工合成的引物在低溫下分別與模板DNA單鏈形成雜交鏈）、延伸（在72 ℃條件下，DNA聚合酶將單核苷酸在引物3'端摻入，延模板3'→5'方向延伸，合成新的DNA鏈）。以上三步反應構成一個周期，每一周期產生的DNA均可成為下一個循環的模板，PCR產物以指數方式增加。
實驗材料	質粒
試劑、試劑盒	Taq DNA 聚合酶引物 dNTP混合物 PCR Buffer
儀器、耗材	PCR 擴增儀
實驗步驟	1. 按下列組分配制PCR 反應液：共50 μl 2. PCR 反應條件 95 ℃ 5 min 95 ℃ 30 sec 55 ℃ 30 sec 30 Cycles 72 ℃ 1 min 72 ℃ 10 min 4 ℃ forever 3. 瓊脂糖凝膠電泳檢測結果展開
注意事項	PCR 反應液在冰中配制，然后置于PCR 反應儀上進行PCR反應，這樣可增強PCR擴增的特異性，減少PCR過程中的非特異性反應，能得到良好的PCR 結果。