哺乳動物精核的制備實驗

哺乳動物組織培養細胞（如 HeLa 細胞）

PBS裂解緩沖液緩沖液 B

帶有 B 型研磨棒的杜恩斯勻漿器光學顯微鏡

1. 培養并收獲 3L 1×10⁶ 細胞/ml 的哺乳動物組織培養的細胞（如 HeLa）， 用 1L PBS清洗兩次。

2. 用 20 倍于沉淀體積（40 ml） 的裂解緩沖液重懸細胞沉淀，轉移到杜恩斯勻漿器中，用 B 型研磨棒研磨 15 次以裂解細胞。在顯微鏡下觀察裂解液。

3. 4℃，3000 g 離心 15 min。

4. 使用裂解緩沖液重復重懸及離心兩次，再用緩沖液 B 重復一次。在最后一次離心之前，將重懸液用 2 mol/L NaCl 稀釋 10～30 倍，測量 A₂₆₀ 值，估計核 DNA 的總量。

5. 用 2 倍于沉淀體積的緩沖液 B 重懸得到的核，測量重懸液的總體積。

6. 輕輕攪動，一滴一滴地加入 1 體積的緩沖液 B/0.6 mol/L KCl/10％ （ V / V ） 甘油。

4℃ 連續輕輕攪動 10 min。如有需要輕輕勻漿。

7. 4℃， 17 500 g 離心回收精核 30 min。精核在液氮或干冰中速凍，并且可在 -80℃ 儲存一年以上。