實驗材料 噬菌體
試劑、試劑盒 瓊脂糖LBNaOHSSCTris·Cl
儀器、耗材 硝酸纖維素膜培養箱
實驗步驟
1. 通過系列等比稀釋滴定噬菌體文庫的滴度。
2. 重組噬菌體與鋪平板的宿主菌混合于培養試管中（表一），于37 ℃溫育20 min。
表一、噬菌體文庫鋪平板組分最佳配制方法
3. 按每個平板的噬菌體數決定篩選文庫時將用到的平板數。
4. 該數目取決于文庫中重組噬菌體的數目和目的克隆出現的概率。
5. 在試管中加入0.7%頂層瓊脂糖，并迅速傾倒在37 ℃保溫的LB上平板上，37℃培養約6~12 h，至噬斑布滿平板，但大小適當互不相連。
6. 平板置于4℃1 h以上方可用于濾膜影印實驗。
7. 用原珠筆在硝酸纖維濾膜上做好標記，標記面朝上。
8. 將濾膜覆蓋在預冷的長有噬斑的LB平板上1~10 min 用20-G針頭穿刺標明定位方向后。
9. 用平頭鑷子取出濾膜，面朝上輕放在紙巾或濾紙上，室溫晾干10 min 以上。
10. 接著，濾膜轉印面朝上，依次放在3張分別飽蘸下面3種液體的Whatman 3 MM 濾紙上，各1~2 min。
（1）0.2 mol/l NaOH / 1.5mol/l NaCl
（2）0.4 mol/l Tris·Cl pH7.6 / 2×SSC
（3）2×SSC
10. 將濾膜置于真空烤箱中80℃干烤90~120 min，或者置于42℃的恒溫箱中過夜，若暫不做雜交實驗，濾膜可用干燥的濾紙夾好，室溫保存。