通過用 32P 標記探針的原位雜交，可篩選攜帶有固定化 DNA 的濾膜，這些 DNA 來源于噬菌斑。該技術是強有力的、高度特異的和很靈敏的，能從數千個噬菌斑中鑒別出單一的重組子。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。
| 實驗方法原理 | 通過用 32P 標記探針的原位雜交，可篩選攜帶有固定化 DNA 的濾膜，這些 DNA 來源于噬菌斑。該技術是強有力的、高度特異的和很靈敏的，能從數千個噬菌斑中鑒別出單一的重組子。 |
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| 實驗材料 | 噬菌體 DNA放射性標記探針 |
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| 試劑、試劑盒 | 氯仿預雜交液SMSSPE |
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| 儀器、耗材 | 煮沸的水浴玻璃（Pyrex ) 烘烤平皿或其他雜交器皿膠水培養箱放射性墨Whatman 3 MM 紙 |
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| 實驗步驟 | 一、材料
1. 緩沖液和溶液
氯仿
預雜交液
SM
2X SSPE
洗液 1（2X SSC，0.1% (m/V) SDS）
洗液 2（1X SSC，0.1% (m/V) SDS）
洗液 3（0.1X SSC，0.1% (m/V) SDS）
2. 核酸和寡核苷酸
固定于膜上的噬菌體 DNA
放射性標記探針
3. 專用設備
煮沸的水浴（用于雙鏈探針變性）
玻璃（Pyrex ) 烘烤平皿或其他雜交器皿
膠水，水溶性（如 FaberCastell 公司的 UHU Stic)
預置于適宜雜交溫度的培養箱
放射性墨
Whatman 3 MM 紙
二、方法
1. 如果濾膜是干的，將經烘烤或交聯的濾膜漂浮在 2X SSPE 表面，直到自下而上完全濕透，再將濾膜浸沒 5 min。
2. 將濾膜轉移至含有預雜交液的 Pyrex 平皿或其他雜交器皿中，每張 82 mm 濾膜用 3 ml 預雜交液或每張 132 mm 濾膜用 5 ml 預雜交液。將濾膜置搖床中于適宜的溫度下（即在水溶液中雜交為 68℃，在 50% 的甲酰胺溶液中雜交則為 42℃）溫和地振搖 1~2 h 或更長。
3. 通過 100℃ 加熱 5 min 變性 32P 標記的雙鏈探針，然后置冰水浴快速冷卻，而單鏈探針不需要變性。
4. 將變性探針加入至浸泡了濾膜的預雜交液中，在適宜的溫度下溫育 12~16 h。
5. 當雜交完成后，將濾膜快速從雜交液中取出，立即浸入放置于室溫的大體積（300~500 ml ) 洗液 1 中。輕輕晃動濾膜，且在清洗過程至少翻動一次。5 min 后，轉移至新鮮的洗液中，繼續輕輕晃動。再重復漂洗過程兩次。
6. 在 68℃ 于 300~500 ml 的洗液 2 中漂洗兩次，時間為 1~1.5 h。
7. 將濾膜置于 Whatman 3 MM 濾紙或紙巾上，在室溫風干。在濾膜的背面貼上水溶性膠水，然后排列在一張干凈、干燥、平整的 3 MM 濾紙上（編號的一面朝上），并用力壓濾膜，使其粘在濾紙上而無法移動。在 3 MM 濾紙上選數個非對稱的點，滴上放射性墨汁或化學發光標記。這些標記被用于對齊放射自顯影與濾膜。用 Saran 公司的包裝膜（Wrap/Cling Film) 蓋住濾膜和標記。用膠帶將包裝膜在 3 MM 濾紙的背面封住，將濾紙上的包裝膜拉直，防止起皺。
8. 將濾膜進行 X 射線片（Kodak 公司 XAR-2、XAR-5 或相當產品）曝光，帶增感屏 -70℃ 曝光 12~16 h。
9. 將 X 射線片顯影，根據放射性墨汁或化學發光標記與濾膜對齊，然后用非放射性的紅色纖維尖頭筆在 X 射線片的相應位置標上對應于編號濾膜的非對稱性點。
10. 通過與瓊脂平板上方向標記的比對找到陽性克隆。
11. 挑取陽性克隆，并保存于含 1 滴（50 μl ) 氯仿的 1 ml SM 中。
12. 為了純化雜交陽性的噬菌斑，將從扣取瓊脂塊上回收到的噬菌體組分（通常為 50 μl 10-2 稀釋液）鋪平板培養，隨后進行新一輪的雜交篩選。
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