實驗概要
抗原特異性T細胞在細胞免疫應答中發揮著核心作用，因此定量測定抗原特異性T細胞數量在判定機體細胞免疫功能方面提供重要的信息。傳統的抗原特異性T細胞功能檢測方法有經典的Cr51釋放試驗、有限稀釋法（LDA）、酶聯免疫斑點試驗（ELISPOT）等，但是這些方法或多或少都存在操作繁瑣、檢測結果誤差較大等缺點。根據抗原特異性T細胞上TCR與MHC-多肽復合物特異結合的原理，可以利用Tetramer技術檢測抗原特異性T細胞。雖然MHC-多肽單體能與TCR結合，但其親和力低，解離速度很快，因而不能直接用于特異性T細胞的檢測。為解決這一問題，Altmen等于1996年首創了MHC-多肽四聚體技術。其具體原理是借助生物素-鏈霉親和素系統，將MHC-多肽復合物四聚化，單個MHC-多肽四聚體分子可與細胞表面的多個TCR結合，從而大大提高了MHC-多肽復合物與TCR的親和力和穩定性，便于利用流式細胞儀進行檢測。與其他技術相比，該技術具有迅速、直接檢測抗原特異性T細胞的優點，且靈敏度高，特異性強。即使當體內抗原特異性T細胞水平低于1%，用此技術仍可準確測定其數值。
主要試劑
所需主要試劑：
帶有PE/APC熒光標記的MHC-肽四聚體
來自HLA-A0201人群的欲檢測細胞／全血
抗-CD8-FITC /其它抗體
紅細胞裂解液（Cat# 6910001）
FACS洗滌液（含0.1%疊氮鈉和0.1%BSA的PBS）新鮮配制。
實驗步驟
標準操作程序——檢測外周血中抗原特異性T細胞數量
1. 外周血單個核細胞
1) 分離1×106左右細胞，離心細胞500xg 3分鐘，棄上清，細胞沉淀重懸于100μl FACS洗滌液。
2) 在細胞懸液中加入5μl帶有熒光標記的MHC-多肽四聚體，室溫避光反應20分鐘。
3) 加入2ml FACS洗滌液重懸細胞，500xg 3分鐘離心棄上清，細胞沉淀重懸于100μl FACS洗滌液。
4) 加入適量的抗-CD8-FITC /其它抗體。在室溫繼續避光反應20分鐘。
5) FACS洗滌液洗細胞1次，500xg 3分鐘，細胞沉淀重懸于適量FACS洗滌液中。
6) 樣品用細胞流式儀分析。
2. 全血
1) 取抗凝全血100～200μl，加入2～3ml 紅細胞裂解液，混勻后室溫作用5～10分鐘，500xg 3分鐘離心棄上清，細胞沉淀重懸于100μl FACS洗滌液。
2) 其它步驟如以上所述步驟2～6進行。
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