固體培養基可以分為兩類:（1）一類是用天然的固體狀物質制成的，如用馬鈴薯塊、麩皮、米糠、豆餅粉、花生餅粉制成的培養基，酒精廠、釀造廠等常用這種培養基;（2）另一類是在液體中添加凝固劑而制成的，如實驗室中常用的瓊脂固體斜面和固體平板培養基。這種培養基廣泛用于微生物的分離、鑒定、保藏、計數及菌落特征的觀察等。
| 實驗方法原理 | 固體培養基的凝固劑一般不是微生物的營養成分，只起固化作用。理想的凝固劑應具備以下條件:不會被微生物分解利用;不會因高溫滅菌而受到破壞;在微生物生長的溫度范圍內保持固體狀態;對微生物及操作人員均無毒害作用;透明度好、凝固力強;價格低廉，配制方便。常用的凝固劑是瓊脂。瓊脂的主要成分是硫酸半乳聚糖，絕大多數微生物都不能分解利用它。瓊脂的熔點為96℃，凝固點為40℃，因此，在一般的培養條件下都呈固體狀態，而且透明度強。正是這些優良特性，使瓊脂取代了早期使用的明膠而成為常用的凝固劑。 |
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| 試劑、試劑盒 | 瓊脂胰化蛋白胨NaClNaOH四環素 |
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| 儀器、耗材 | 玻璃瓶燒瓶 |
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| 實驗步驟 | 一、極限培養基平板
800 ml水加入15 g瓊脂，高壓滅菌15 min。然后加人200 ml無菌的5 X 極限培養液和碳源。待冷卻至50℃，加人補充成分。每個10 cm平板倒入32~40 ml 培養基（每升培養基可制作25?30個平板）。于室溫干燥2?3天，或將平板的上蓋稍 微打開，于37℃或在層流通風櫥干燥30 min，將晾干的平板包裹好儲存于4℃。
二、豐富培養基平板
將水加人以下所列出的培養基配方的成分中，定容至1L，高壓滅菌25 mm。待冷卻至50℃，加人補充成分。每個LB或H培養基平板倒人32~40 ml培養基（每升培養基可制作25?30個平板），每個λ肉湯培養基平板倒人約45 ml培養基（每升培養基可制作20個平板）。平板的干燥和保存如上所述。
1. H 平板，每升
10 g 胰化蛋白胨
8 g NaCl
15 g 瓊脂
2. λ肉湯平板，每升
10 g 胰化蛋白胨
2.5 g NaCl
10 g 瓊脂
3. LB平板，每升
10 g 胰化蛋白胨
5 g 酵母提取物
5 g NaCl
1 ml 1 mol/L NaOH
15 g 瓊脂或者瓊脂糖 三、添加物
其他的抗生素和半乳糖苷
1. 抗生素（如果需要）：
氨芐青霉素 50 ug/ml 四環素12 ug/ml
2. 半乳糖苷（如果需要）：
X-gal終濃度為 20 ug/ml
IPTG終濃度為0. I mmol/L
四、頂層瓊脂培養基
頂層瓊脂培養基常用于將噬菌體或細胞在平板的表面均勻分布成一薄層。以1 L的 批量配制頂層培養基，高壓滅菌15 min使之熔化，冷卻至50℃，輕輕旋轉晃動使其混 合均勻，分裝至100 ml瓶中。再次高壓滅菌，冷卻，擰緊蓋子，于室溫保存。使用前， 用水浴或者微波爐熔化頂層瓊脂，冷卻至45?50℃并維持在該溫度。頂層瓊脂中瓊脂 的含量比普通平板的少，在該溫度下，頂層瓊脂可保持熔化狀態數天。
1. LB 頂層培養基，每升
10 g 胰化蛋白胨
5 g 酵母提取物
5 g NaCl
7 g 瓊脂
2. γ頂層球脂培基，每升 10 g 胰化蛋白胨
2.5 g NaCl
7 g 瓊脂
3. 頂層瓊脂糖培養基，每升
10 g 胰化蛋白胨
8 g NaCl
6 g 瓊脂糖 五、穿刺瓊脂培養基
穿刺瓊脂培養基用來保存菌株。加人胸腺嘧啶則可使thy-細菌生長。據認為，半胱氨酸可很大程度地延長細菌在穿刺培養物中的存活時間。
1. 穿刺培養基，每升
10 g 營養肉湯
5 g NaCl
6 g 瓊脂
10 mg 半胱氨酸鹽-Cl
10 mg 胸腺嘧啶
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| 注意事項 | 1、當高壓滅菌鍋顯示鍋內溫度達到121℃時開始計時，使溫度穩定在121℃以上（鍋內壓力嚴禁超過0.165?M?Pa），保持15-20min。
2、切斷電源，讓高壓滅菌鍋自然冷卻，必須等壓力降到0.05?M?Pa以下時打開排氣閥。 |
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| 其他 | 理想的凝固劑應具備以下條件：
①不被所培養的微生物分解利用；
②在微生物生長的溫度范圍內保持固體狀態，在培養嗜熱細菌時，由于高溫容易引起培養基液化，通常在培養基中適當增加凝固劑來解決這一問題；
③凝固劑凝固點溫度不能太低，否則將不利于微生物的生長；
④凝固劑對所培養的微生物無毒害作用；
⑤凝固劑在滅菌過程中不會被破壞；
⑥透明度好，粘著力強；
⑦配制方便且價格低廉。實驗用的凝固劑有瓊脂、明膠和硅膠，后者用于配制自養微生物的固體培養基。對其他多數微生物來講，以瓊脂最為合適，一般加入1.5—2.5%即可凝固成固體。此培養基可供分離、鑒定、活菌計數、菌種保藏等用。 展開 |
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