西土有一名寺，昂迪·賽司騰姆寺，有大師。
一日，來了一位東土小鮮肉。
鮮肉問大師：“學業有惑，可解？”
大師反問：“你術業可是生物？”
鮮肉驚奇：“是，大師神奇，何以得知？”
大師指鮮肉鞋履：“鞋上兩塊藍斑，乃考馬斯亮藍，其漬尚新，你近來必在搗弄蛋白，對否？”
鮮肉羞赧：“正是近日檢測蛋白，跑膠無數，不慎滴上。現已斬獲Western陽性結果一組，然不知課題如何進一步深入。”
大師欣然：“體外數據方為首步，須繼之以體內定位，方法比如免疫組織化學/免疫細胞化學，西土稱為IHC/ICC。”
鮮肉：“在下尚無相關歷練，聽人言IHC/ICC并非易事，不知決竅何在？”
大師眉間一抹豪氣：“確有決竅，我已將其制成一帖，習之可使鮮肉秒變大師！”
言畢，大師取出一帖，交于鮮肉：“你我有緣，今贈帖于你，助你早日修成正果，技高一籌，Paper無憂。”
鮮肉喜出望外，接過這帖，叩謝大師，旋即翻開讀了起來：
【方法學】
IHC/ICC利用抗原抗體相互作用來定位檢測抗原表達，始于1970s，因方法成熟、結果直觀而長盛不衰。根據樣本類型和顯色方式，組合成下圖的四個流派。
各流派只在樣品準備等步驟略有不同，后續介紹就以最流行的IHC（石蠟切片顯色法）為例。
【操作流】
IHC流程包括二甲苯脫蠟，梯度乙醇復水，抗原修復，內源性過氧化物酶失活，非特異性物質封閉，抗體孵育，DAB顯色這幾步，中間的三步是關鍵。
【優化點】
流程中的三個關鍵步驟各有優化訣竅：
抗原修復
IHC特有步驟，因甲醛固定組織會造成目標表位內部或表位與附近無關氨基酸的交聯、表位構象或電荷的改變，這可能導致目標表位被掩蓋，阻礙抗體的結合。
抗原修復指的是恢復表位-抗體結合的技術。分蛋白酶誘導的表位修復（PIER）和熱誘導的表位修復（HIER）。
一般認為PIER作用機制是切割了可能遮蓋表位的肽段。其缺點在于成功率低，且可能破壞組織形態和目標抗原。
HIER被認為能逆轉一些交聯，并實現表位二級或三級結構的重建。HIER的成功率比PIER要高得多。
HIER對時間（1-10min）、溫度（95-99℃）、緩沖液和pH敏感，要根據經驗或通過預實驗確定。抗原修復液有中性（貨號CTS015）、堿性（貨號CTS013）和酸性（貨號CTS014）三種。我們發現通常堿性抗原修復液的處理效果較好（如下圖）。
內源性過氧化物酶失活
顯色法常用辣根過氧化物酶（HRP）。在腎、肝或含有血管（包含紅細胞）等組織都有內源性的過氧化物酶活性，會造成假陽性，用3% H2O2配制的試劑浸泡10min可將其失活。