土壤微生物測定方案

土壤微生物是土壤中一切肉眼看不見或看不清楚的微小生物的總稱，嚴格意義上應包括細菌、古菌、真菌、病毒、原生動物和顯微藻類。其個體微小，一般以微米或毫微米來計算，通常1克土壤中有幾億到幾百億個，其種類和數量隨成土環境及其土層深度的不同而變化。它們在土壤中進行氧化、硝化、氨化、固氮、硫化等過程，促進土壤有機物的分解和養分的轉化；那土壤內的微生物如何測定呢，下面喆圖小編帶大家來了解一下。

        一、培養方法

       （1）稀釋平板涂抹法

具體操作如下：

①準確稱取 10g（精確到 0.001）采集的鮮土，倒入裝有 90 ml 無菌水的 500 ml 的三角瓶中，置于往返震蕩機上（120r/min，常溫），震蕩 20 min，使土壤充分分散成為土壤懸液。

②將上面的土壤懸液用無菌移液管吸取 5 ml 到 45 ml 稀釋液中，即為 10-2稀釋度，依次按 10倍法稀釋，制成 10-1~-~10-6稀釋度。注意:每次吸取懸液時,在稀釋液中反復吸入和吹出 3-~5 次,減少因管壁吸附而造成的誤差,并使懸液進一步分散,每個稀釋度需要更換無菌吸管吸取懸液。)

③根據各類微生物在土壤中的數量多少選擇適當稀釋度的懸液接種。本實驗選擇細菌的稀釋度為 10-~10-5,放線菌為 10~-10-4,真菌為 10-1~-10-3。 -3-2

④土壤懸液的接種方法:在無菌培養皿中倒入 15~20 ml 選擇性培養基,待凝固后,用 0.2 ml無菌移液槍吸取0.2 ml各稀釋度的土壤懸液,然后立即用涂抹棒將懸液均勻的涂抹于培養基表面。用同一支吸管接種時,從高稀釋度開始,依次接種到低稀釋度。

⑤接種了土壤懸液的培養皿,平放在超凈工作臺 20~30 min,使得菌液滲透入培養基內,然后倒置于 28~-30°C 恒溫培養箱中培養一定時間:細菌 1~-3 天,放線菌 10-~14 天,真菌 3~-7 天。

⑥培養結束后,取出培養皿計數。

       (2)稀釋培養法

一系列稀釋度的制作與稀釋平板法相同。根據各類微生物在土壤中數量的多少選擇適當的稀釋度,分別接種 1 ml 稀釋液與制作好的液體培養基中,根據需要做 3~4 次重復,適溫培養。2 三大類土壤微生物培養基的分離三大類土壤微生物的分離采用稀釋平板涂抹法,每個菌種要求做 3 個稀釋度,每個稀釋度做3-4次重復,選取細菌和放線菌的菌落在20~-200之間的培養皿、真菌的菌落在 10-~100 的培養皿計數,并計算三次重復的平均值。每克干土中微生物數量計算式:

每克干土中菌落數=(菌落平均數×稀釋倍數×100%)/(濕土質量×干土)

1, 細菌:牛rou膏蛋白胨培養基:牛rou膏 3g、蛋白胨 5g、瓊脂 18g、蒸餾水 1000 ml、pH 值 7.0-~7.2 2, 放線菌:改良高氏 1 號培養基:KNO3 1g,FeSO4·7H2O 0.01g,K2HPO4 0.5g,淀粉 20g,MgSO4·7H2O

0.5g、NaCl 0.5g、瓊脂 18g、3%重鉻酸鉀溶液 3.3ml、蒸餾水 1000ml、pH 值 7.2~-7.4

3,真菌:馬丁氏培養基(虎紅瓊脂):蛋白胨 5g、KH2PO4 1g、MgSO4 0.5g、葡萄糖 10g、瓊脂 18.5g、孟加拉紅 0.033g、氯霉素 0.1g、蒸餾水 1000ml

所有培養基需在濕熱滅菌鍋中121°C滅菌 20-~30min