基因敲除的技術路線如下:
(1)構建重組基因載體﹔
(2)用電穿孔、顯微注射等方法把重組DNA轉入受體細胞核內﹔
(3)用選擇培養基篩選已擊中的細胞﹔
(4)將擊中細胞轉入胚胎使其生長成為轉基因動物,對轉基因動物進行形態觀察及分子生物學檢測。