基因槍技術又叫做微粒轟擊技術或者生物彈道技術,是通過高壓氣體加速或者huo藥爆炸直接往完整的組織或者細胞中送入包裹了DNA的球狀金粉或者鎢粉顆粒的一種技術。
基因槍的操作方法
準備材料
將一薄層培養基鋪在9cm培養皿上,在培養皿中心平鋪材料,直徑在3cm范圍內。
處理金粉
在離心管中放置60mg金粉或鎢粉,將無水乙醇1m1加入,經過3min的充分振蕩,以9615g離心1rain,去上清再將無菌水1m1加入,混勻充分之后,以9615g離心,將以上步驟重復三次。zui后在1m1無菌蒸餾水中懸浮金粉,儲存在室溫下或者4攝氏度下。
處理DNA
將50tA金粉懸浮液去除,再將5rd的質粒DNA溶液、亞精胺依次加入,經過3rain的振蕩,放置在室溫下10min,以9615g離心10s,棄上清,將無水乙醇250l加入,振蕩后以9615g離心10s,棄上清。沉淀重新在水乙醇中懸浮。
操作基因槍
在無菌條件下進行基因槍的所有操作,步驟如下:
1、基因槍表面及樣品室使用70%乙醇進行消毒。固定工具、微彈載體及其固定器、阻擋網和可裂圓片使用70%乙醇浸泡15min后,然后放在超凈臺上晾干。使用70%乙醇對可裂膜片、固定蓋、微彈載體發射裝置的表面進行滅菌,吹干。
2、在固定環中嵌入微粒載片,在微粒載片中心加入DNA及金粉的混合物,干燥大約1min。
3、在其托座上安裝可裂膜,順時針擰到氣體加速器上。
4、安裝好固定環(帶有微粒的面朝下)、微粒載片、阻擋網托座、阻擋網、和空間環,將蓋子旋緊,在槍入插入。
5、在轟擊室中放入樣品,將門關好。
6、將氦氣瓶的總閥打開,順時針轉氦氣調節閥,使得氦壓表指針的示數超過可裂膜壓力。
7、將基因槍及變壓器開關打開。
8、將真空鍵按動,當真空度至26-28inHg=88.05~94.82kPa時,將Hod鍵迅速按下,接著將發射鍵(fire)按住,并保持不動,直到激發為止,接著將發射鍵關掉,再將Ho1d鍵關掉。
9、將通氣鍵按住,直到歸零真空表,然后將樣品取出。
10、關機。旋緊氦氣瓶的總開關,打一次空槍,歸零氦壓表指針以后,再將氦壓表調節閥逆時針旋轉,將基因槍的總開關及變壓器開關關閉。