1. 準備金粉顆粒
( 1 ) 稱取 20 m BIO-RAD 亞微米金粉(0.6 μm) 至 1.5 ml 離心管中,加入 1 ml 無水乙醇。超聲波處理 2 min,短暫離心 3s,然后棄上清。重復用乙醇洗兩遍。
( 2 ) 加入 1 ml 無菌水,超聲波處理 2 min,短暫離心 3s, 然后棄上清。重復一次。
(3 ) 加入 1 ml 無菌水,渦旋振蕩重懸。每 50 μl 分裝到 1.5 ml 離心管,每次分裝前用渦旋振蕩混勻,確保金粉均勻分布。分裝好后 -20℃ 儲存。
2. DNA 包裹金粉顆粒
下面的操作步驟最好在冰上無菌環境中操作。
( 1 ) 取出分裝的 50 μl 金粉懸浮液室溫融化(見第 3.2 節步驟 1 ),超聲波處理 1~2 min (見注 30 ) 。然后渦旋混勻確保完全重懸,特別是需要進一步分裝更小體積時更需注意(見注 31 ) 。
( 2 ) 加入 5 μl DNA (TE 緩沖液或者水溶解的 1 mg/ml DNA) (見注 32 ) 或者水(見注 33) ,渦旋振蕩使 DNA 與金粉充分接觸(見注 34)。
( 3 ) 在離心管蓋加入 50 μl 2.5 mol/L CaCl2 和 20 μl 0.1 mol/L 亞精胺(見注 35 ) ,混勻后再加入離心管內。渦旋混勻,高速短暫離心 3~5 s,沉淀金粉-DNA 復合體。棄上清。
( 4 ) 加入 150 μl 無水乙醇漂洗金粉-DNA 復合體顆粒,使顆粒充分重懸(見 注 36 和注 37)。高速短暫離心 3~5 s,沉淀金粉-DNA 復合體。棄上清。
( 5 ) 最后懸浮于 85 μl 乙醇中,放在冰上待用(見注 38)。 展 |