基因槍法轉化小麥實驗

幼胚盾片                                                          

乙醇                                                                  漂白消毒劑                                                          

誘導培養基                                                          

下面介紹的是經過優化的針對幼胚盾片轉化的方法，幼穗可以代替幼胚盾片使用。對某些特定的

品種，幼穗轉化比幼胚盾片轉化更有效，如普通小麥品種 T.aestivum vars. Baldus 和 Brigadier，

以及其他小麥亞族 Triticeae；硬粒小麥品種 T.turgidum ssp 和小大麥（見注 23 和注 24 )。

1. 收集和消毒小麥穎果

( 1 ) 收集溫室生長 10~12 周的小麥穗（見注 25 ) 。

( 2 ) 從穗中剝出穎果（見注 26)。

( 3 ) 用 70% 乙醇將小麥穎果滅菌 5 min，然后用 10% 漂白消毒劑浸泡 15~20 min，中間晃動幾次。

( 4 ) 用滅菌水至少洗三次。保持滅菌后穎果的濕度，但是不要浸泡在水中。

2. 分離和預培養幼胚盾片

( 1 ) 在無菌環境中，顯微鏡下分離幼胚 [ 圖 4 .1 ( a ) ] 并且切除胚軸以防止萌發(見注 2 7 )。

( 2 )  將 25~30 個盾片放置在包含誘導培養基（MS9% 0.5 DAg）、直徑 9 cm 的培養皿的中間區域，

將胚的切面放置在培養基上，即完整的盾片作為轟擊面 [見注 28 , 圖 4.1 (b ) ]。

( 3 )  使用封口膜 Nescofilm   (Fisher  Scientific  UK) 封好平板，轟擊前將培養皿放在 22℃

黑暗條件下預培養 1~2 天（見注 29) 。