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  • 發布時間:2019-04-11 18:20 原文鏈接: 基本方案1在成年小鼠腦內植入遺傳修飾過的細胞

    實驗材料

    遺傳修飾細胞的培養成年宿主小鼠聚烯吡酮磺溶液

    試劑、試劑盒

    麻醉劑

    儀器、耗材

    小鼠大腦圖片集耳打孔器帶有電極操作的腦定位支架以及漢密爾頓注射夾外科用具bulldog 磁夾海綿中號鑷子傷口夾26G針漢密爾頓注射器

    實驗步驟

    1.為移植開始培養基因修正的細胞,收獲 80%~90% 的匯合度的細胞。手術時,當麻醉和準備動物的時候準備好懸浮細胞(支持方案)。手術期間,每 30~60 min 重懸細胞。

    2.參考鼠腦圖像決定注射位置,通過 anterior-posterior 和 medial-lateral 坐標假定腦功能區定位支架的前肉點,通過垂直坐標假定硬腦脊膜。

    3.麻醉一個成年的宿主,注射 0.25 ml 麻醉液,每 160 g 體重和標記動物加 1 個耳打孔器或耳標。

    4.放置好一個麻醉小鼠在一個腦功能區定位區域。以維持嚙鼠動物腦在正確的位置,插人耳棒,小心在計算好的刻度上系緊。準確放置口棒。

    5.在皮膚上開個小口,位于眼耳中線。用 10 號解剖刀分開皮膚并清潔皮膚,去除血和粘連組織。

    6.確定前肉點,確定坐標,在頭蓋骨上開一個 1mm 直徑的孔,用 26G 針切除硬腦脊膜。

    7.用吸管輕輕吹打以重新分開細胞懸液。吸 1~3ul 75000~300000 個細胞每注射點。在腦功能區定位支架上裝好帶有 5ul 漢密爾頓注射器的電操縱器,并避免氣泡。

    8.輕輕注射溶液,并使注射速度低于 1ul/min。當注射完畢時,抬起針頭 1 mm,靜置 2 min,收針。

    9.如果多于兩個注射點,在新坐標上再打一個 1 mm 直徑的孔,重復注射操作。避免每只小鼠注射量大于 10ul。

    10.拿開小鼠,清潔頭蓋骨,用抗菌素消毒。用傷口架子夾緊皮膚,把動物轉移至恢復籠子。


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