基礎培養基的制備

培養基是根據微生物  生長繁殖時對營養物質的需要而配制的營養制品，含有營養物質及適宜的酸堿度，經滅菌后使用。

常用的培養基按用途分為：基礎培養基、營養培養基、鑒別培養基、選擇培養基及厭氧培養基。按物理性狀分為固體、半固體和液體三種。

實驗目的：

了解常用的液體、固體、半固體培養基的成分、制備方法和用途。

實驗材料：

牛肉、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂  、0.1mol/lNaOH溶液、酚紅指示劑、蒸餾水等。

實驗方法：

一、肉湯培養基

1、 將鮮牛肉除去筋膜和脂肪，切成小塊后用絞肉機絞碎，以每500g碎牛肉加1000ml蒸餾水的比例混合后，置4℃冰箱過夜。

2、 次日取出浸泡物倒入容器內煮沸半小時，使肉渣凝固，也可煮沸一小時不經冰箱過夜。

3、 用紗布和脫脂棉過濾，除去肉渣，即成肉浸汁。加入1%蛋白胨及0.5%氯化鈉，加熱溶解并用蒸餾水補足蒸發失去的水分。

4、 待冷至50℃左右時，調該溶液的pH至7.4~7.6。校正pH的方法為：①取三支與標準比色管（pH7.6）相同的空比色管，其中一管內盛放蒸餾水5ml；另外兩管各加入欲測的肉湯培養基5ml，其中一管內加0.02%酚紅指示劑0.25ml（滴定管），搖勻。②按圖2所示排列，舉起比色架，對光觀察。若滴定管色調較淡或為黃色，即表示培養基偏酸性，需滴加0.1mol/L NaOH矯正；若呈深紅色，即表示偏堿性，應滴加0.1mol/L HCl矯正；使之與標準比色管色澤相同為止。通常未矯正前的肉湯均呈酸性。記下用去的NaOH（或HCl）溶液量，由此計算出矯正全量培養基時所需NaOH（或HCl）溶液量。

1、 酸堿度矯正后，加熱煮沸10分鐘，用濾紙過濾，補足水分，再調一次pH值。

2、 分裝肉湯于三角燒瓶或試管，瓶口、管口加棉塞并用紙包扎。

3、 置高壓滅菌器內103.43Kpa20分鐘滅菌備用。

可用市售的牛肉膏代替牛肉，用量為0.3%，其余成分相同（如蛋白胨、氯化鈉等）加熱溶解，調節pH至7.6左右，煮沸10分鐘，補充失水、過濾、分裝，滅菌后備用。

二、固體培養基

1、在上述制備的肉湯中加入2-3%的瓊脂。瓊脂為海藻中提取的一種多糖類物質，本身無營養作用，不能被細菌  利用。因其加熱到100℃后可溶化，冷卻至40℃左右又可凝固，故可作為賦形劑。加熱溶化，脫脂棉過濾，補足失水，分裝三角燒瓶和試管。

2、置高壓滅菌器內103.43Kpa滅菌20分鐘，取出后趁熱將試管傾斜一定角度放置，待瓊脂凝固即成瓊脂斜面培養基（圖3）。三角燒瓶內培養基冷至50-60℃時在超凈臺或無菌室內將其傾注于滅菌平皿內（15-20ml），凝固后即成瓊脂平板。

另外，實際工作中現多使用合成營養瓊脂干燥粉末制劑。其方法為：稱取41克營養瓊脂干燥粉末加入1000ml冷蒸餾水中混合放置10分鐘，隔石棉鐵絲網微火煮沸使其完全溶解，分裝于中試管中（約5~7ml）或三角燒瓶，103.43kPa（121℃）滅菌15分鐘，即可備用。

三、半固體培養基

1、操作方法同固體培養基，但瓊脂加入量較少，僅0.3-0.5%。

2、分裝試管，滅菌后使試管直立，冷凝后即成半固體培養基