復蘇細胞是否貼壁跟你凍存時的操作有直接關系。而且細胞的傳代數越多，即細胞越老，越禁不起低溫的折騰。復蘇后，細胞有個休眠期，大約7-14天不等。只要不死，你就慢慢養著。突破了某個時間點，你會發現細胞又神奇的康復了。但要等到細胞狀態良好，傳2代以上再做實驗。尤其是流式、RNA干擾之類的。
細胞不好貼壁，細胞生物學專家CHI
scientific
建議您嘗試以下6點：
復蘇后洗滌一下,畢竟DMSO影響細胞的生長。
最好用塑料瓶培養,如果是玻璃瓶,那么可以用鼠尾膠原包被一下培養瓶,或者用鹽酸對培養瓶進行蝕刻,效果應該還可以，或者涂
fibronectin/collagen
/BSA，也可以幫助細胞貼附
還有就是你的凍存的細胞是否是完全死了,如果是的話是不可能貼壁的,因此在復蘇后我建議你用臺盼蘭染色看一下死細胞和活細胞的數目及比例.
4.換液時間延長，盡量不要用力搖動。
5.盡量縮短復蘇時間
6.操作的環境溫度最好不要變動太多。