一． 血液學及血細胞形態學臨床應用：
● 是臨床血液病診斷與治療及臨床醫學檢驗學的基礎工作。
● 血細胞形態學適用于臨床血液病診斷快速簡捷的要求。
● 近年來由于血細胞學及超微結構、免疫學、細胞遺傳學、融合基因、造血干細胞及其細胞因子、骨髓造血微環境、基質細胞、樹突狀細胞、淋巴系細胞發生及其疾病表現，細胞增殖動力學與細胞凋亡以及骨髓組織病理學應用，推動了血液的臨床與實驗室的新知識迅猛發展。
●
當前血液病不能單憑臨床與形態學 作出
診斷，必須以臨床和血細胞形態學為基礎，將免疫學、細胞遺傳學及分子生物學新知識、新技術應用到血液學中，構成現代臨床血液學與分子生物學診斷技術，彌補形態學的經驗性與主觀性帶來負面缺陷，才能提高血液病的診斷與治療水平。
● 進入 90 年代以來，國內外采用多學科聯合技術綜合診斷技術與方案：
○ FAB-AL （ 1976 ）、 NCL （美國國家癌癥研究所）對 FAB-AL 分型的補充 （ 1995 ）、 AL-MIC 分（類）型， MIC 及 MICM 分型（ 1985-1990 ）；
○ FAB-CL 分型 （ 1989 ）、中國 CL 分型 （ 1997 ）；
○ FAB-MDS 分型（ 1982 ）、 MIC 協作組對 FAB-MDS 分型提出補充建議（ 1987 ）；
○ WHO 對造血系統 及髓系惡性 疾病和淋巴系惡性腫瘤 WHO 分類 （ 2000 ）；
● 血細胞形態學診斷技術正在進入顯微 圖象 軟件時期：
○創造出許多多功能軟件，如血細胞形態學、細胞化學染色、血液病診斷與鑒別診斷、 CL 診斷與治療及教學系統多媒體軟件等。
○將顯微鏡與微機相連，應用儲存、分類、檢索軟件，編輯、打印診斷報告，并可附多幅細胞 圖象 。
二． 血細胞形態學基本概念
血細胞形態學作為臨床血液病基礎診斷：
● 觀察血細胞形態和數量及其比例的變化來研究造血器官的結構和功能是血液學的重要組成部分，是診斷造血系統疾病最基本、最簡便實用的檢查方法，被臨床普遍應用。
● 正常人的血液及造血器官中，各種血細胞的數量有一定的正常范圍，不同血細胞及細胞發育的不同階段有一定形態結構特點。
● 在造血系統疾病中，如果造血功能發生紊亂，就會從血細胞形態學的量變和質變中反映出來。
● 血細胞形態學檢查應包括外周血和骨髓兩部分組成，必須平行進行檢查。因為，外周血的血細胞改變往往反映骨髓病變的信息，才有利于診斷。
三．血細胞染色
（一） 細胞染色機制 ：染色是將細胞經染色劑的物理及化學作用，使 其清楚 顯示細胞各個組成部分，有利辨識細胞形態。
染色可分二個步驟：
1 ．染料受相應物質吸附而附著于物質表面；
2
．固著作用，即染色粒子進入細胞內起化學反應（染料透過細胞膜的學說很多，尚無定論），與相應的物質形成溶解度很低的鹽固著于細胞內而顯色。染色劑皆有選擇作用，其染色不是將細胞全部一齊著色，而只是將其中一部分染色，多余的被沖洗掉。目前多以吸附學說（電力吸附、機械吸附、化學吸附）來解釋。
●
一般染色方法由兩種染色劑（酸性、堿性）組成，通常細胞核及漿 堿性粒體為
堿性，細胞漿為酸性。酸性染料可和帶正電荷的（堿性）物質結合，這種物質稱嗜酸性物質，對酸性染料具有親和力，因此嗜酸性粒細胞之顆粒本身為堿性物質；堿性染料可和帶負電荷的（酸性）物質相結合，這種物質稱嗜堿性物質，對堿性染色粒具有親和力，因此嗜堿性粒細胞之顆粒本身為酸性物質。另一種蛋白質在
pH6.4 呈等電狀態 ，本身所含的正 / 負電荷相等，因此，既能和酸性染料又能和堿性染料結合，這種物質稱中性物質，如中性粒細胞之顆粒。
● 一般用 pH6.4 PBS 來稀釋染液，使每次染色都在同一 pH 中進行，讓細胞在恒定條件下著色，使染色效果趨于一致。
染液過堿時，蛋白質帶有負電荷，對 次甲藍有色 部分的正電荷吸附力強，因此染成的細胞一般著色較藍，說明 pH 不適合。
●
染色與固定亦有極大關系，因細胞 經固定
后，其蛋白質的電力吸附（電附）可能有變化，有些固定液能將細胞某部分的電附加強，使其染色更為容易。因此，這種固定劑不僅有固定作用， 也有媒染作用 （
Mordunt ），染色極為容易。因此， 電附是
染色過程中最重要的作用。機械吸附在染色過程中也參與作用，如用蘇木液和伊紅染色，細胞核不是純藍色，藍色中略有紅色，胞漿也不能盡為紅色，紅色中略有藍色或
兩者皆帶些 紫色。這是因為伊紅與胞核 雖無電附仍有 機械吸附，故也能染上少量紅色，蘇木液與胞漿 雖無電附但也有
機械吸附，因而胞漿略顯藍色。化學吸附（作用）在染色中應用，最早應用于金屬染色劑（氯化金、硝酸銀等）的金屬與細胞內物質起化學作用，使金屬在細胞內變成沉淀物或死亡物，顯示細胞結構或物質。近年來此原理用于細胞酶化學染色。
● 血細胞的染色多采用瑞氏染色和 姬姆薩 染色兩種，但作者取其兩種染色的優點，采用瑞氏和 姬姆薩 混合染色法，比單用一種染色法更佳。但近年來也出現一些快速和改良染色方法及染色液商品化，對血細胞形態染色不一定適用。
（二）瑞氏（ Wright ' s staim ；美藍－伊紅Ｙ）染色：
1 ．瑞氏染料是由堿性染料美藍（ Methvlem blue ）和酸性染料黃色伊紅（ Eostm Y ）合稱伊紅美藍 染料即瑞氏 （美藍－伊紅Ｙ）染料。
伊紅鈉鹽的有色部分為陰離子，無色部分為陽離子，其有色部分為酸性，故稱伊紅為酸性染料。美藍通常為氯鹽是堿性的，美藍的中間產物結晶為三氯化鎂復鹽，其有色部分為陽離子，無色部分為陰離子，恰與伊紅鈉鹽相反。
2 ．用 甲醇作瑞氏 染料溶劑，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶劑，有兩種作用：
（ 1 ）甲醇使瑞氏染料中美藍（ M ）與伊紅（ E ）在溶液中離解，可使細胞成分選擇性吸附其中的有色物質而著色。
甲 醇
ME （瑞氏染料）—— —— → M + + E -
在配制的瑞氏染液中美藍如放置過久即可氧化而含有天青，美藍天青與伊紅化合物能使核染成紫紅色，但不能使胞漿染為藍色，多余 美藍就可以 使胞漿染成藍色，染色主要是化學作用，是離子彼此結合的反應。
（ 2 ）甲醇具有強大的脫水力，可將細胞固定在一定形態及增加細胞結構的表面積，提高細胞對染料吸收作用，同時由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升溫，加速染色反應。
3. 瑞氏染液配制：
(1) 瑞氏染液配制：
瑞氏染料 830gm 或 1g
甲醇（ AR ） 500ml 或 600ml
先稱干燥（事先放入溫箱干燥過夜）瑞氏染料放置乳缽內，
用乳棒輕輕 敲碎染料成粉末，再行研磨至聽不到 研芝麻聲
即呈細粉末，加少許甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸內顯“一面鏡”光澤，而無染料粉粒沉著，再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮，靜置片刻，將上層液體倒入
一
清潔儲存瓶內（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重復數次，直至乳缽內染料及甲醇用完為止，搖勻，密封瓶口，存室溫暗處，儲存愈久，則染料溶解、分解就越好，一般儲存
3 個月以上為佳。
(2) 緩沖液：
1) 緩沖液作用：染色對氫離子濃度是十分敏感的，據觀察 pH
值的改變，可使蛋白質與染料形成的化合物重新離解。 緩沖液須保持 一定的 pH 使染色穩定， PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8
，偏堿性染料可與緩沖液中 酸基起 中和作用，偏酸性染料則與緩沖液中的堿基起中和作用，使 pH 恒定。
2) 緩沖液配制（ pH6.4~6.8 ，弱酸性）：
配方 1 ： 配方 2 ：
1% KH 2 PO 4 30ml M/15 KH 2 PO 4 73.5 ml
1% Na 2 HPO 4 20ml M/15 Na 2 HPO 4 26.5ml
H 2 O( 新鮮 ) 加至 1000ml
置室溫黑暗處，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染則應報廢。
（四）姬 姆薩 （ Giemsa ' s stain ；天青 - 伊紅）染色
1． 姬 姆薩染料是天青（藍） 2 號伊紅 AzurII Eqsin) 和天青（藍） 2 號合成的。
2． 姬 姆薩紅染料（ Giemsa, 天青 - 伊紅）染液配制：
姬 姆薩紅染料（粉末） 0.5g 或 7.5g
甲醇（ AR ） 33ml 或 500ml
甘油（ AR ） 33ml 或 500ml
先將姬姆薩染料放入乳缽中，逐漸倒甘油研磨溶于甘油中，置于 56 ℃ 水溫箱內， 90 ～ 120 分鐘，然后加入甲醇，搖勻后放置數天，過濾后或不過濾即可使用。此染液放置室溫陰暗處，時間越長越好。
使用染液 9 臨時配置）： 姬 姆薩染液 1ml ，加 DDH 2 O10ml 混勻。即可使用。