3． 染色步驟：
（ 1 ）先用甲醇固定 2 ～ 3 分鐘。
（ 2 ）將血或骨髓涂片放置 姬 姆薩使用液 15 ～ 30 分鐘。
（ 3 ）涂片用自來水沖洗，在室溫中干燥待查。
（五）瑞 氏及姬姆薩 染色液的鑒定：剛配好或放置一個月以上的染液可進行下列鑒定：
1 ．取 1 滴染液于乳白 玻 板上，自行迅速擴散開，其顏色變紫紅色，且有偽足形成。
2 ．取 1 滴染液加 1 滴緩沖液，染液由深藍 色立即 變為紫紅色。
3 ．取血片或骨髓片 進行試染檢查 ，觀察染色后各類細胞的胞核、胞漿及顆粒著色情況， pH 是否合適及染色合適時間。如有上述變化，表明染液合格，可供使用。
（六）瑞氏染色 (Wright ' s)- 姬 姆薩（ Giemsa ' s ）混合染色：
瑞氏染色的染料配方濃度對細胞核著色程度適中
, 細胞核結構和色澤清晰艷麗 , 對核結構的識別較佳 , 但對胞漿著色偏酸 , 色澤偏紅 ,
對細胞漿內顆粒特別是嗜天青顆粒及嗜中性顆粒著色較差 , 而姬姆薩染色對胞漿著色能較好的顯示胞漿的嗜堿性程度 ,
特別對嗜天青、嗜酸性、嗜堿性顆粒著色較清晰 , 色澤純正 , 而對胞核著色偏深 , 核結構顯示較差 , 故采用以瑞氏染液為主 姬
姆薩染液為輔的混合染色。
染色步驟 :
1. 先用瑞氏染液將涂膜面充分覆蓋；
2. 稍等片刻再加姬 姆薩 染液 2-3 滴加減 ( 根據涂片上細胞多少及增升程度酌情而定 ) ；
3. 稍等 1-2 分鐘后 , 再加磷酸鹽緩沖液 , 加時應緩慢地 一 滴一滴加在涂片膜上 , 直至膜面上染色 液形成 表面張力而終止染色液加入；
4. 染色 30-40 分鐘；
5. 分色：用自來水緩緩沖洗至少 3 分鐘以上 , 待干，勿用濾紙吸干 , 以免濾紙纖維污染涂片。
四．血液學及血細胞形態學內容及自身特點：
（一）血常規檢查（
Hb 、 RBC 、 WBC 、 Plt 、血細胞比積、 RBC-MCV 、 MCH 、 MCHC
及血小板容積曲線），用自動化儀器提高工作效率，為使結果準確可靠，必須建立監測方法，搞好質控，此屬數值質控。我國已較普遍開展全國、省、市（地區）質控。但普遍存在應付質
控質量 的問題，并未能切實解決自身質控問題。
（二）白細胞分類：白細胞分類的自動化已普遍應用，只能為患者普查與篩選之用。遇有問題應用顯微鏡觀察，彌補自動化儀器缺陷。一般醫院顯微鏡檔次偏低，分辨率低，正確使用和維修欠缺，因而要更好地發揮光鏡的觀察效應。
（三）骨髓、外周血細胞形態學及分類，是血液病及臨床各科患者基本檢查及診斷依據。反映繼發性疾病的血液學表現，了解機體狀況、感染（細菌、病毒、寄生蟲等）等改變。
（四）血細胞涂片自身的特點：
1 ．涂片不易均勻：由于血液是混懸液，其中白細胞、有核細胞、 RBC 、血小板的形態大小、比重及生物活性和血漿成分等的不同和制片技術差異、質量分布不均勻性差異頗大。
2 ．細胞分布和檢查的非隨機性：
(1) 細胞分類標準與觀念不一；
(2) 采樣和計數 100~200 個白細胞的局限性；
(3) 細胞分布的生理變動；
3. 與疾病的相關性；
4. 室內、室間分類不一致性，開展室間質控也是促進形態學提高重要手段。
（五）血細胞形態學（外周血及骨髓）質控：自 1983 年以來，澳大利亞皇家病理學質控中心和英國皇家進修學院 WHO 質控中心及最近美國洛杉磯質控中心，國內：全國及省地市也普遍開展，由質控標本涂片發展圖片指定細胞識別。
五．血細胞形態學采樣、制片染色與檢查要求：
( 一 ) 采樣、制片及染色，三道工序至關重要，是細胞形態學檢查的成敗關鍵。要得到合格的涂片標本，做好上述工序，應注意以下要求：
1. 采樣、制片：
(1) 玻 片要求：國內 1.0mm × 26mm × 76mm ± 0.5 ，美國 NCCLS 規定 1.0mm × 25mm × 75mm ± 0.5 ，要嚴格清潔，接近中性 .
(2) 推片：選擇優質推片， 推片兩端 邊緣整齊、平滑。也可選用有機玻璃，其大小、厚度 與坡片相同 ，兩端之邊緣 應加工 光滑， 以利推片用 。
(3)
采外周 血（樣），擦去第一滴血，迅速采血，量適中，如綠豆粒大小，具有 一定推片技術 ， 推片傾斜 45 °±，推成血膜長度 25mm ～
35mm ，寬度 18 ～ 20mm ，血膜四周留有空隙區，血膜 終尾離玻 片終端至少 10mm
，血膜均勻，薄如蟬翼，尾端形如弧狀，迅速扇（搖）干，血膜具有頭、體、 尾不同
厚薄區域。此外，涂片時，還要考慮患者的血液狀態，如貧血程度、血液粘稠度、 WBC 或有核細胞多少等因素， 調整推片技巧 。
(4) 如若采用靜脈血推片，用 K 3 -EDTA 或肝素抗凝， 推制血 片應盡早進行（最遲在 1 ～ 2 小時內）。
（二）染色：是識別細胞形態的重要標記工序：
常規瑞氏 - 姬姆薩染色要點：
1 ．要得到滿意、漂亮的血細胞染色標本，新鮮涂片迅速染色是很重要的。
2 ．染色液配制要合格；
3 ．涂片切勿用甲醛固定，否則不著色；
4 ．染色的好壞與染色液、緩沖液的質量及比例、加液間隔時間、保持 玻 片染色液面的張力等染色技巧均有重大關系。染液要覆蓋涂膜面，再加緩沖液（ 1:2 ），其量要充足、混均，染色時間要 30 分鐘以上。
5 ． 細胞著色的觀察：
(1)
當染液與緩沖液混合后，甲醛吸水液溫升高，發生劇烈反應，直至液膜表面的“染色粒”呈均勻分布，隨染色時間的推延，“染色粒”由“染色小粒”聚集成“染色大粒”，逐漸由外緣向內緣推進至
染色面 中心（此過程需要 20-30 分鐘以上），則表明細胞著色已完成，
(2) 再用自來水緩流沖洗，使染色液沉渣及染色粒浮去，使其充分起分色作用，去除細胞染色中浮色，顯示出胞核結構及細胞清晰形態，待干，鏡檢。
六．外周血細胞形態檢查技巧：
外周血中三種血細胞數與形態學表現是：
● 反映骨髓造血狀態及血液病和其他疾病的 廚窗 ；
● 是檢查與觀察疾病的重要指標；
（一） WBC 形態學診斷技巧：
1 ． WBC 數值準確性估計：
（ 1 ）目前自動化計數儀時有出現結果的偏差，低倍鏡觀察血涂片可以粗略估計 WBC 數值及分布。低倍視野 WBC 數：正常約 3~5 個，增多 6 個以上，減低 3 個以下。
（ 2 ） WBC 如推至片尾，分布不均，估計將有一定難度。較大的細胞如單核、異淋及中性粒細胞及不成熟細胞多在片尾，體部則多為較小的淋巴細胞，使分類造成偏差，所以分類部位在適當調整。
2 ． 白細胞計數值限度分級：
（ 1 ） WBC 正常范圍： 4.0~10.0 × 10 9 /L;
（ 2 ） WBC 正常限度以下 :
● 輕度減少 (<4.0 ～ 3.0 × 10 9 /L),
● 中度減少 (<3.0 ～ 2.0 × 10 9 /L),
● 極度減少 (<2.0 × 10 9 /L);
（ 3 ） WBC 正常高限度以上 :
● 分輕度增多 (>10.0 ～ 20.0 × 10 9 /L),
● 中度增多 (>20.0 ～ 40.0 × 10 9 /L),
● 明顯增多 (>40.0 ～ 80.0 × 10 9 /L)
● 極度增多 (>80.0 × 10 9 /L) 。
以此與所測知 WBC 計數值作粗略對比，推斷 WBC 計數值的準確性。
（ 4 ）如在血片分類計數過程中發現較多有核紅細胞時，
● 計出血片中有核紅所占 % 率，即以校正原 WBC 計數值減去有核紅所占比例，求出外周血中 WBC 總數值，
● 另作 WBC 分類計 100 個過程中遇到多少有核紅細胞，即有核紅細胞 個 /100 個 WBC ，
● 或作血片有核細胞分類計數（包括有核紅細胞），計出有核紅細胞所占 % 率。
3 ． WBC 分類正常范圍及其病理性改變：
（ 1 ） WBC 分類正常范圍：
● 新生兒出生后最初 24 小時白細胞數高，主要為中性粒細胞 , 至第 3 ～ 4 周，中性粒細胞與淋巴細胞比例倒轉，直至 4 歲淋巴細胞比例仍多。表 1
● 白細胞分類正常范圍由于民族、地區、年齡、性別及其生理性變化的影響，以及檢查本身的技術差異，即使一人同次取材不同涂片、一張涂片多次分類計數結果也不可能完全一致，但不可差異太大。
● 分類中占大比例的中性粒細胞或淋巴細胞呈正態分布，占小比例的嗜酸 / 嗜堿性粒細胞及單核細胞則為 Poisson 分布。
（ 2 ） 病理性形態學改變：
①中性粒細胞：
● 中性粒細胞分葉分化程度，被認為從干細胞至粒細胞生成是否正常及與粒細胞年齡相關；如核分葉不良， Pelger-huet 現象； 核僅一葉 或二葉，其百分率增加時謂之“左移”，反之，多數細胞四葉以上謂之右移，一般認為正常中性粒細胞胞核分葉情況：
4 葉者為 15 ～ 25% 3 葉者為 40 ～ 50%
2 葉者為 20 ～ 40% 1 葉者為 < 5%
血象中如有多個 5 葉以上者提示有巨幼細胞性貧血的可能。
右移現象
—多見于巨幼細胞性貧血、肝臟疾患，并可以 5 葉與 4 葉所占比例計算，得出簡單實用的分葉指數：
分 葉指數 =5 葉 /4 葉 × 100% 正常核分葉指數： 0 ～ 17%
—還見于 缺鐵性貧血、類風濕性關節炎、遺傳性高分葉癥（顯性遺傳）及某些敗血癥（以左移多見）。
左移—見于感染、敗血癥、出血、小兒慢性中性粒細胞減少癥等。
● 中性粒細胞毒性顆粒及空泡改變：中性粒細胞由于受到外來刺激（包括感染及應激反應）引起顆粒變性，粗大 著色深染 及漿內空泡等病理性改變。上述改變及白細胞數增多和出現幼稚及原始細胞則為類白血病反應。
● 慢性粒細胞白血病（ CML ）的中性成熟粒細胞一般胞漿顆粒較正常稀少，但無空泡及毒性顆粒，而慢性中性粒細胞白血病（ CNL ）的中性成熟粒細胞則與類白血病反應形態相似。
● 假性嗜酸性顆粒—在某些干細胞疾病如 MDS 、粒細胞缺乏癥、腎性貧血某些患者中性粒細胞的顆粒增多，形態異常，類似嗜酸性樣顆粒的出現。
● 遺傳性白細胞異常疾病：是先天性白細胞異常疾病，臨床上雖罕見，但為了提高辨別的能力，應有所認識。
Pelger-Huer
白細胞異常：屬于顯性遺傳，其白細胞形態特點：核分葉不良，不分葉，核呈花生形、 亞鈴形等 形狀，無核絲形成，胞漿正常，此外，還有假性（ 即繼發
性） Pelger-huet 白細胞異常應加以鑒別，后者常見于急性腸炎、傷寒、瘧疾、流感，無家族史，但在原發病得到治療后白細胞形態恢復正常。
Alder-Reilly 顆粒異常：常染色體隱性遺傳性多糖代謝障礙性疾病，常伴有軟骨畸形、肝、脾腫大等，中性、嗜酸性及嗜堿性粒細胞含有多量嗜天青顆粒遮蓋整個細胞，單核細胞亦有類似改變。
May-Hegglin 異常：為常染色體顯性遺傳疾病，在中性及嗜酸性粒細胞 漿 內含有 Dunle 小體，常伴有巨血小板及血小板減少、紫癜，由于細胞的游走功能差，故病人常出現感染癥狀。繼發性也可見于猩紅熱、球菌性感染、燒傷早期等某些病例。
②嗜酸性粒細胞： 此種細胞在人體每日規律性變動，晨至午下降，午后始升，午夜至次晨 3 時達高峰數值，哮喘患者及夜間工作者其規律與正常相反，晨 9 至 12 時達高峰。