為保證輸血安全和有效，輸血前需要篩查患者 的不規則抗體，以使患者輸注配合的血液。漏檢低 效價的弱抗體會導致血液輸注無效，甚至導致溶血 性輸血反應［1］。本實驗室遇到1 例因多次輸血致產 生弱的不規則抗體的病例，報告如下。
1 材料與方法
1．1 研究對象及資料 患兒，女， 9 歲，既往無輸血 史，懷疑藥物導致貧血，血型鑒定為 A 型，ＲhD 陽 性。2017 年 5 月 11 日入院，15 d 內輸血 12 次，輸 血效果不佳。本實驗室全程受醫院委托進行交叉配 血，第 12 次輸血前檢出抗 E 抗體，回顧性檢測該抗 體的產生過程，分析其對輸血效果的影響。
1．2 主要試劑和儀器 篩選細胞和譜細胞購自荷 蘭 Sanquin 公司，抗人球蛋白卡購自美國 Bio-Ｒad 公 司，凝聚胺、聚乙二醇( polyethylene glycol，PEG) 試 劑購自長春博德公司，酸放散試劑購自珠海貝索生 物技術公司，木瓜酶粉劑、抗 E、抗 e、抗 C、抗 c 均購 自上海血液生物醫藥公司，所有試劑均在有效期內 使用。KA-2200 型離心機( 日本久保田公司) ，試劑 卡孵育箱和離心機、數字顯示式恒溫水浴箱、可調移 液器( 美國 Bio-Ｒad 公司) 。
1．3 不規則抗體鑒定 鹽水法、凝聚胺法、微柱凝 集法( microcolumn gel test，MGT) 3 種常用血型血清 學試驗方法和酸放散試驗均按試劑說明書操作，直 接抗人球蛋白試驗采用 MGT。
1．4 PEG-MGT 在試管中加入 100 μL 患者血漿、 200 μL PEG 試劑和 50 μL 2%～5%紅細胞，37 ℃溫 育 15 min 后用鹽水洗滌 4 次，配制成合適濃度的懸 液。由于本試驗中試管抗人球蛋白法檢測 PEG 處 理后的細胞凝集強度很弱，為便于判讀，將處理后的 細胞配成合適濃度的懸液，加入 IgG 單抗的凝膠卡 并離心，記錄凝集強度。
1．5 酶－MGT 采用 2 步酶法，將篩選細胞和譜細 胞用鹽水洗滌 3 次后配成 2% ～3%濃度，加入等量 的木瓜蛋白酶，37 ℃溫育 10 min 后用鹽水洗滌 3 次。由于試管抗人球法檢測木瓜酶處理后的紅細胞 與患者血漿凝集強度太弱無法判讀，將酶處理紅細 胞配制成 1%濃度的低離子懸液，加入抗 IgG+C3d 的凝膠卡，再加入患者血漿，37 ℃溫育后離心，記錄 凝集強度。
2 結果
2．1 直接抗人球蛋白試驗 見表1。第1 次輸血前 患者紅細胞直接抗人球蛋白試驗呈 2+，第 2 次呈 1+，第 3 次和第 4 次呈 w+，第 5 次至第12 次輸血前 樣本直接抗人球蛋白試驗全為陰性。
2．2 抗體篩查 第 1 至 4 次輸血前抗篩鹽水法、凝 聚胺法、MGT 均為陰性，由于此時患者直接抗人球 蛋白試驗陽性，為避免自身抗體干擾未進行 PEG-MGT和酶－MGT 試驗。第 5 至 8 次輸血前抗篩 鹽水法、凝聚胺法、MGT、PEG-MGT 和酶－MGT 均為 陰性。第 9 次輸血前酶－MGT 檢出不規則抗體，第 12 次輸血前酶－MGT 與 PEG-MGT 均檢出不規則抗 體，譜細胞格局符合抗 E 抗體( 篇幅所限未列出譜 細胞格局表) ，患者 Ｒh 分型為 CCDee。歷次抗篩結 果見表 1。另外，第 1 次和第 12 次輸血前抗篩鹽水 法室溫下為陰性， 2 次的血清 4 ℃溫育 10 min 后抗篩細胞和自身對照均凝集且強度均為 3+，均含有自 身冷抗體。
2．3 抗體性質 第12 次輸血前的患者血清經2-Me 處理 30 min 后，酶－MGT 法檢測抗篩變為陰性，證 實抗 E 抗體為 IgM 性質。
2．4 酸放散試驗 第 1 次和第 12 次輸血前的患者 樣本分別進行酸放散試驗，第 1 次的紅細胞放散液 未檢出特異性抗體，第 12 次的紅細胞放散液采用 酶－MGT 法檢出抗 E 抗體。
2．5 抗體對輸血有效性的影響 血紅蛋白量隨天 數變化的曲線見圖 1。結合圖 1 和表 1 結果發現， 從第 13 天開始檢測到抗 E 抗體，第 6 天、12 天、15 天輸注不含 E 抗原的血液，均使血紅蛋白提高。而 第 5 天、 9 天、10 天、14 天僅輸注含有 E 抗原的血 液，均未能提高血紅蛋白水平。
3 討論
鹽水法、凝聚胺法、MGT、酶法是常見的不規則抗體篩查方法，凝聚胺法、MGT、酶法對于檢測 Ｒh 系統的常見 IgG 類抗體，差異無統計學意義［2］; 而 IgM 類抗體通常采用鹽水法篩查，部分 IgM 抗體可 由 MGT 檢測到［3］。本例弱 IgM 抗 E 抗體伴隨自身 冷抗體，室溫鹽水法陰性，4 ℃鹽水法由于冷抗體無 法鑒定特異性抗體，PEG－試管抗人球蛋白法( PEGIAT) 和酶－試管抗人球蛋白法( 酶－IAT) 亦因凝集 強度太弱而不易判讀。采用酶－MGT，患者直抗陰 性，37 ℃溫育排除冷抗體的干擾，使用含有多種抗 人球蛋白的凝膠卡檢測血漿，具有更高的靈敏度且 結果直觀，為鑒定弱 IgM 型不規則抗體提供了可選 方法。為避免補體 C3 結合自身抗體的干擾，PEGMGT 使用 IgG 單抗卡，該方法在本例弱抗體檢測過 程中的靈敏度不及酶－MGT。本研究中患者輸注不 含相應抗原的血液，血紅蛋白水平得到提升，而含有 相應抗原的血液不能提高血紅蛋白水平，證明該抗 體具有臨床意義。
受血者產生不規則抗體與輸血次數密切相關， 當輸血次數大于 6 次，不規則抗體的發生頻率可達 89．7% ［4］ 。在我國最常見的不規則抗體是抗 E 抗 體［5］，本研究中患者 15 d 輸血 12 次，出現輸注無 效，經鑒定產生抗 E 抗體。對于多次受血者可檢測 E 抗原，輸注 E 同型或相容的血液，降低多次受血者 產生不規則抗體的概率，減少其輸注無效和發生輸 血反應的頻率，從而提升輸血的安全性和有效性。
參考文獻略。