多聚酶鏈式反應PCR

多聚酶鏈式反應PCR ：

(1)PCR原理：在模板DNA、引物和4種脫氧單核苷酸存在的條件下依賴于耐高溫的DNA聚合酶的酶促合成反應。以欲擴增的DNA做為模板，以和模板正鏈和負鏈末端互補的兩種寡聚核苷酸做為引物，經過模板DNA變性、模板引物復性結合、并在DNA聚合酶作用下發生引物鏈延伸反應來合成新的模板DNA。模板DNA變性、引物結合(退火)、引物延伸合成DNA這三步構成一個PCR循環。每一循環的DNA產物經變性又成為下一個循環的模板DNA。這樣，目的的DNA的數量將以2n的形式累積，在2小時內可擴增30(n)個循環，DNA量達原來的上百萬倍；

(2)PCR過程：1. 模板DNA的變性：模板DNA經加熱至95℃左右一定時間后，DNA雙鏈被解離為單鏈并游離于溶液中的過程；2. 模板DNA與引物的退火(復性)：人工合成的一對引物在適合的溫度下(通常50-65℃)分別與模板DNA需要擴增區域的兩翼進行準確配對結合的過程；3. 引物的延伸：在適當的溫度下(通常70~75℃)，以三磷酸脫氧核糖核苷(dNTP)為反應原料，DNA模板--引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下，單鏈核苷酸從引物的3’末端摻入，沿靶序列模板,按堿基配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈。重復循環變性--退火--延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環的模板.每完成一個循環需2一4分鐘，在一個由計算機控制的循環加熱器上經過三十個循環，就可以把原來的樣品精確地擴增了2的30次方倍。PCR特點：快速，準確，安全檢測病原體。