實驗方法原理
實驗材料 永生化淋巴細胞株
試劑、試劑盒 青霉素谷氨酰胺胎牛血清植物血球凝集素胸苷秋水仙胺KCl甲醇冰乙酸檸檬酸鈉SSC甘油生物素-16-dUTP地高辛-11- dUTP10 XdNTP 混合物
儀器、耗材 超凈臺細胞培養瓶Nunc 管培養基相差顯微鏡染色缸加熱板 裝有Pinkel濾光片輪的CCD顯微鏡 Chromoprobe Multiprobe?-T 試劑盒恒溫搖床氨芐青霉素卡那霉素氯霉素LB瓊脂平板2 X YT 培養基
實驗步驟
一、固定的中期染色體細胞懸液的制備
（1）外周血樣品
1.37℃水浴鍋內預熱RPMI-1640培養基、FCS、L-谷氨酰胺和青霉素/鏈霉素。
2.在二級細胞培養用超凈臺中，無菌條件下配制完全培μ基：100mL FCS、5mL L-谷氨酰胺、5mL青霉素/鏈霉素，加RPMI-1640至500ml。3.在2個Nunc培養管中，各加0.25mL外周血、5mL完全培養基、PHA(終濃度2%)。
4.37℃培養箱中孵育72h。
5.加10OpL15mg/mL的胸苷到每個培養物中，輕輕混勻。
6.37℃培養箱中孵育16?18h。
7.180g離心5min。
8.棄上清，用5mL完全培養重懸細胞。
9.180g離心5min。
10.棄上清，用5mL完全培養重懸細胞團塊。
11.37℃條件下孵育5h。
12.加100/×L10jLtg/mLKaryoMa×秋水酰胺。
13.37℃條件下孵育10min。
14.180g?離心5min。
15.棄上清，用37℃預熱的7mL0.075mol/L KCl懸起細胞團塊。
16.37℃條件下孵育15min。
17.180g離心5min。
18.棄上清。
19.將管子放在渦旋振蕩器上以中速振蕩，緩慢滴加預冷的甲醇：冰乙酸(3:1)固定液到細胞中。當細胞懸液變成褐色時，加速滴加固定液，至總體積5mL。
20.180g離心5min，棄上清。
21.加5mL預冷的固定液。
22.180g?離心5min，棄上清。
23.加5mL預冷的固定液。
24.180g離心5min，棄上清。
25.加3mL預冷的固定液重懸細胞。
26.儲存在-20℃條件下備用。