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  • 發布時間:2020-06-01 17:47 原文鏈接: 大鼠(NAP2/CXCL7)ELISA試劑盒技術原理

    實驗原理

    用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗該指標抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗該指標抗體、HRP標記的親和素,經過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。

    試劑盒組成:

    封板膜:2片(48)/2片(96)

    說明書:1份

    密封袋:1個

    標準品:2700ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存

    酶標包被板:1×481×962-8℃保存

    樣品稀釋液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存

    顯色劑A液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存

    顯色劑B液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存

    終止液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存

    濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存

    標本的采集及保存

    1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

    2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

    3. 細胞培養物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

    注:標本溶血會影響最后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

    4. 細 胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右 (2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

    5. 組 織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

    6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。

    7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

    大鼠(NAP-2/CXCL7)ELISA試劑盒技術原理我司產品均提供說明書,免費代測。

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