大鼠主動脈平滑肌細胞培養實驗

SD大鼠

PBS FBS DMEM

手術剪 手術鉗 眼科剪刀 眼科鑷子 大頭針 手術刀 培養皿

一、實驗步驟

1. SD 大鼠(150-200 g)，斷頭，浸入75%的酒精中15 min。

2. 置入超凈臺中，將大鼠固定于殺鼠板上，在無菌條件下打開腹腔，分離出胸主動脈、腹主動脈， 摘出。

3. PBS 清洗3 遍，剝去外膜，用手術刀片刮去內膜，留下中膜并將其移入1 mL 的培基中、剪成1x1 mm² 大小組織塊。

4. 再將PBS清洗組織塊，移入25 mL 的培養瓶中，用尖嘴彎管均勻貼好組織塊，放入37℃、5% CO₂的培養箱倒置培養6 小時后，待組織塊貼壁后，再加入2.5 mL 培養液后放回培養箱中。

5. 隨后每3 天予以全量換液。

二、結果

3-5 天后可見組織塊周圍有細胞爬出，大約2 周后80－90%融合。

 第四步中最后加入2 mL 培養液時應使其順無組織塊的皿邊緣緩慢流下，勿使組織塊吹下。