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  • 發布時間:2020-08-17 20:54 原文鏈接: 大鼠主動脈平滑肌細胞培養

    實驗方法原理 運用組織塊貼壁法進行SD大鼠胸主動脈平滑肌細胞培養,并用倒置相差顯微鏡觀察、HE染色后形態學觀察以及用免疫組化對培養細胞進行鑒定。

    實驗材料 SD大鼠

    試劑、試劑盒 PBSFBSDMEM

    儀器、耗材 手術剪手術鉗眼科剪刀眼科鑷子大頭針手術刀培養皿

    實驗步驟

    一、實驗步驟


    1. SD 大鼠(150-200 g),斷頭,浸入75%的酒精中15 min。


    2. 置入超凈臺中,將大鼠固定于殺鼠板上,在無菌條件下打開腹腔,分離出胸主動脈、腹主動脈, 摘出。


    3. PBS 清洗3 遍,剝去外膜,用手術刀片刮去內膜,留下中膜并將其移入1 mL 的培基中、剪成1×1 mm2 大小組織塊。


    4. 再將PBS清洗組織塊,移入25 mL 的培養瓶中,用尖嘴彎管均勻貼好組織塊,放入37℃、5% CO2的培養箱倒置培養6 小時后,待組織塊貼壁后,再加入2.5 mL 培養液后放回培養箱中。


    5. 隨后每3 天予以全量換液。


    二、結果


    3-5 天后可見組織塊周圍有細胞爬出,大約2 周后80-90%融合。


    注意事項

    1.  第四步中最后加入2 mL 培養液時應使其順無組織塊的皿邊緣緩慢流下,勿使組織塊吹下。


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