試劑、試劑盒 大鼠肝臟 苯酚 -甲酚混合液 萘 1.5-二磺酸溶液 洗滌液 A 洗滌液 B 乙醇溶液 三異丙基萘磺酸鈉 無水乙醇
實驗步驟
一 材料與設備
1）大鼠肝臟 ：大鼠用頸部擊打法處死 ，取出肝臟 ，立即置于液氮屮 ，備用
2）苯酚 -甲酚混合液 ：將 500 g 苯酚（須重結晶）及 70 mlm-甲酚溶于 50 m l 蒸餾水中 ，并加入 0.5 g8-羥基喹啉
3）萘 1.5-二磺酸溶液：0 .5 g 萘 1.5 -二磺酸 溶 于 100 ml 蒸餾中
4）洗滌液 A:20 g 苯甲酸 鈉 ，10 ml m- 甲酚 及 3 g 氯化鈉溶于 100 ml 蒸餾水中
5）洗滌液 B: 75 ml 無水乙醇及 l g 氦化鈉溶溶于 25 ml 蒸餾水中
6)75.% 乙醇溶液
7)三異丙基萘磺酸鈉
8)無水乙醇
二 操作方法
1）稱取鼠肝 15g 左右，加于10 倍體積的苯酚-甲酚混合溶液以及 10 倍體積的萘 5-二磺酸溶液.在下用勻漿器勻漿
2)將勻漿液取出置于燒杯中.2℃ 攪拌 20min,于50℃，6000g 離心 15min，棄沉淀，
3)上淸液加入三異丙萘磺酸鈉，至最終濃度為5%,再加入 1/2 體積的苯酚-甲酚溶液，于 20℃攪拌 20min,然后以 8000g,5℃ 離心 lOmin.棄沉淀
4)在每 100ml 離心上清液屮依次加入 3g 氯化鈉，2g 苯甲酸鈉及 10ml m-甲酌。攪拌溶解均勻后，用 8OOOg，5℃ 離心 lOmin。棄上清液。
5)將沉淀物按下列順序離心洗滌：用冷的洗滌液A 洗二次,洗滌液 B、75% 乙醇溶液各洗一次，再用無水乙醇冼二次，每次均用 25ml 最后得純的鼠肝 rRNA.取出 rRNA，置于裝有 CaCl2 的真空干燥器中干燥。