一、背景
大鼠S100B蛋白(S100B)ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠S100B蛋白（S-100B）水平。用純化的大鼠S100B蛋白（S-100B）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入S100B蛋白（S-100B），再與HRP標記的S100B蛋白（S-100B）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的S100B蛋白（S-100B）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠S100B蛋白（S-100B）濃度。
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
（一）標本要求
1、標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2、不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
（二）注意事項
1、試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2、濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3、各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4、請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請*后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6、底物請避光保存。
二、應用
大鼠S100B蛋白(S100B)ELISA試劑盒可用于新生大鼠缺氧缺血性腦病血清S100B蛋白表達變化的實驗研究：
建立新生SD大鼠缺氧缺血性腦損傷（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）模型，通過檢測不同時間點血清S100B蛋白水平，探討血清S100B蛋白的表達在新生SD大鼠缺氧缺血性腦病中的早期診斷價值，同時探索S100B蛋白在新生SD大鼠缺氧缺血性腦病后的出現時間、出現峰值時間及消失時間，從而進一步為臨床新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)患兒的早期診斷及確定HIE后S100B蛋白最佳采血時間提供實驗依據。
（一）方法
清潔級，封閉群，健康新生7日齡SD大鼠168只，雌雄不限，體重12～18g，隨機分為3組：假手術組，HIBD模型組，健康對照組，每組各56只，HIBD模型組采用改良Rice法制備HIBD模型。根據動物處死時間不同HIBD組又隨機分為7個亞組：0h組、6h組、12h組、24h組、48h組、72h及96h組，每亞組各8只。假手術組及正常對照組也在相應時間點分為7組，每組8只。各組大鼠在相應的時間點斷頭取血后處死，收集血液及腦組織標本。
觀察各組運動行為學變化、腦組織形態學變化及HE染色；雙抗夾心ELISA法檢測血中S100B蛋白的變化。
（二）結果
(1)7日齡SD大鼠在HIBD組建模后出現不同程度的行為異常，正常對照組與假手術組鼠未見異常行為。
(2)正常對照組、假手術組腦組織外觀正常，兩側對稱，無水腫、萎縮及壞死；HIBD模型組在建模后各時間點肉眼觀腦組織大體形態出現不同程度的異常改變。
(3)HE染色：正常對照組、假手術組腦組織和HIBD模型組在建模后0h腦細胞層次清楚、細胞形態正常；HIBD模型組在建模后6h出現不同程度的神經細胞水腫、變性；12h、24h腦組織出現淤血水腫和血管充血；48h、72h神經細胞出現不同程度的壞死，細胞核碎裂、溶解；96h細胞出現大片狀，細胞核碎裂、溶解。
(4)血清中S100B蛋白的表達：HIBD組0h時間點組與正常對照組、假手術組比較血清中S100B蛋白差異無統計學意義（P>0.05）；HIBD組（0h、96h時間點組除外）、與正常對照組、假手術組比較各個時間點血清中S100B蛋白值顯著升高（P<0.05），差異有統計學意義；HIBD組48h時間點組分別與HIBD組6h、12h、24h、72h時間點組比較血清中S100B蛋白值顯著升高（P<0.05），差異有統計學意義；HIBD組6h、12h、24h、72h時間點組組間比較血清中S100B蛋白值差異無統計學意義（P>0.05）。
中國微生物菌種查詢網隸屬于北京百歐博偉生物技術有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家專業提供中國微生物菌種，標準菌種，質控菌株,ATCC菌種,細胞系以及培養基等產品的查詢網站！自成立至今，已提供各類微生物菌種、細胞、培養基數量達四萬余份，接待咨詢客戶數量5萬余人次，成交合同數量2萬余份！是國內微生物菌種及細胞信息Z全的網站！ 我們擁有自主研發能力，提供的ATCC菌種達15000余份,ATCC各類細胞系達3000余份,保藏中心涵蓋菌種資源更達數十萬余份！
文章鏈接：儀器設備網 https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-4384.html