天然培養基包括:血清、組織提取液、如雞血漿,雞胎汁等。其中血清是一種仍在廣泛應用中的天然培養基,市場有產品出售。而血漿應用較少,因此用時多自己制備。內容來源:組織培養和分子細胞學技術。(北京出版社)
| 實驗方法原理 | 雞血漿為最早用于培養的液體,含有纖維蛋白原和一定的營養成分,當與雞胚胎汁混合后,能發生凝固,構成細胞生長的環境,利于細胞向三維空間生長,缺點是易于液化。因制備血漿后不再做無菌處理,全過程必須在嚴密無菌條件下進行。 |
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| 實驗材料 | 雄雞 |
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| 試劑、試劑盒 | 肝素生理鹽水酒精 |
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| 儀器、耗材 | 手術架棉球注射器離心機 |
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| 實驗步驟 | 利用生長一年左右體大、健壯的雄雞,采血壓計前一天禁食,多喂水。
制備方法如下:
1. 肝素溶液制備
配制濃度20 mg/100ml 生理鹽水肝素液,9 磅10 分鐘高壓或濾過滅菌,每小瓶中分裝入0.5 ml 貯4 ℃冰箱中備用; 2. 動物準備
縛雞于手術架上,令仰臥,從雞翅取血;展開雞翅,拔除翅根局部羽毛,選血管粗大部位,碘酒和酒精棉球消毒;
3. 采血
取20 ml 無菌注射器,先吸入肝素液少許,濕潤注射器內壁后,用16號針頭刺入靜脈,吸血10 ml,立即注入離心管中,搖勻;
4. 分離血漿
3000 轉/分 離心10 分鐘后吸出上清血漿,分裝入小瓶中,-20 ℃冰箱貯存備用。
也可采用從雞的心臟穿刺取血,方法是從鎖骨上窩部進針,直接穿入心臟;取血量大而快,用此法采血亦可。 展開 |
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