如何分析電泳

在凝膠電泳儀中，DNA或蛋白質樣品的分離（通常基于大小）是通過施加電場使它們遷移通過凝膠來分離的。凝膠電泳在生物醫學研究實驗室中是常規操作，可用于回答各種不同的問題，因此，實際上并沒有一種通用的方法來分析結果。
例如，諸如蛋白質印跡，RNA印跡和DNA印跡的不同技術都涉及凝膠電泳。
如果您要進行DNA樣品的瓊脂糖凝膠電泳（常見的一種方法），通常需要至少做兩件事：1）區分未切割的質粒與插入片段，帶切口的質粒和切割的質粒，以及2）估計使用標準曲線Excel或計算器計算各種DNA片段的大小。
運作方式如下。
檢查您的實驗室筆記本以確定哪些樣品已裝入哪些通道。當裝載凝膠孔時，您應該注意每個泳道/樣品的身份。
確定哪個泳道包含DNA標準的“階梯”。這些是已知長度的片段。它們的遷移距離可用于通過標準曲線Excel或其他計算器確定樣品片段的大小。
用尺子測量從孔到跟蹤染料的圖像距離，該染料比任何DNA條帶都行進的距離遠（換句話說，它將位于凝膠的底部）。記錄此數字-您使用的單位并不重要。
測量照片上從孔到“階梯”中每個帶的距離，然后用該距離除以跟蹤染料帶所經過的距離。此計算為您提供每個頻段的相對遷移率。
示例：假設跟蹤染料帶移動了6英寸，而我們有三個帶移動了5、4.5和3.5英寸。
他們的相對流動性是什么？答：我們將5、4.5和3.5除以6得到的相對遷移率分別為0.833、0.75和0.5833。
將相對遷移率輸入到電子表格程序（Excel或您使用的任何其他類似程序）中，并將階梯中每個片段的大小（以千堿基為單位）一起輸入。
制造商會為您提供他們提供的梯子中每個碎片的大小，因此您應該已經有了此信息。
在x上繪制具有相對移動性的數據，在y上繪制以千為單位的大小的數據。
在電子表格程序上使用趨勢線函數將方程擬合到數據中。該方程式應為冪方程式（例如x ^ -2），并且應相對較好地擬合數據（R系數至少為0.9）。這將創建一條曲線和一個標準曲線Excel。
查看與您的樣本相對應的譜帶。
請記住，較小的DNA片段比較大的DNA片段穿過凝膠的距離更遠，因此靠近跟蹤染料的片段將小。但是請注意，如果未切割質粒（環狀）DNA，它將像電話線一樣“超螺旋”或扭曲，這實際上會使它比相同大小的線性DNA傳播得更遠。
同樣，未完全切割的“切口”質粒將比相同大小的線性DNA傳播更短的距離。因此，您無法從凝膠中估計未切割質粒的大小。
將每個泳道中的條帶與您在該泳道中加載的樣品的標識相匹配，并確定您所看到的是否是您所期望的。這將取決于實驗的性質。
但是，一般來說，如果您用兩種限制性酶消化插入質粒，則可以預期該插入物中將沒有質粒。
由于它比質粒小得多，您可能會在該泳道中看到兩條帶，一條靠近頂部，而另一條靠近底部。僅用一種限制酶切割的質粒應僅形成一條條帶，該條帶比用兩種限制酶切割的質粒行進的距離要遠一些，但不能遠至插入片段。