如何對PCR擴增的產物進行酶切

限制性內切酶在 PCR擴增體系中仍然有部分活性，可以通過稀釋（3倍以上）擴增混合液，適當提高酶量和反映時間，進行酶切。個人認為需要對PCR產物進行酶切分析通常是為了或基因表 型分析，由于Taq，Pfu等高溫聚合酶在酶切溫度（37度或更高）下，仍然保持一定的活性，高溫聚合酶所具有的聚合或無模板添A或外切修正的功能仍在一 定的程度上表現出來，可能會影響到酶切產物末端的正確性。結果是要么裝不上去，要么裝上去切不下來，測序發現末端引物堿基少了。正確安全的做法是先通過瓊 脂糖電泳回收產物，然后酶切，酶切可以適當提高酶的用量。