如何更好的養細胞

對于好消化的細胞來說，完全不需要將細胞消化到漂起來、加培養基終止后離心，可以在消化到差不多快要脫落的時候，移除大部分trypsin，稍候片刻，直接加培養基將細胞吹打下來，省去離心步驟。殘余的trypsin由于含量很低，所以不會對細胞產生任何影響。

b）對于難消化的細胞，我倒是建議用無鈣鎂PBS洗滌一次后，加入稍微多一點trypsin置37度徹底消化至脫落（一晃細胞就掉下來的那種），然后再加培養基終止、離心。這么做的道理是，細胞消化不徹底，勢必會增加吹打輔助脫落的次數。而吹打次數越多，細胞活性越差。

值得注意的是，有些特殊的細胞，不可以使用trypsin作為消化液。比如我有一株純由EGFRvIII基因驅動、不含其他生長因子信號通路基因突變的腫瘤細胞，用trypsin消化之后，形態會發生劇變，要等兩天才能恢復。經進一步實驗發現，原來是trypsin剪切了EGFRvIII（室溫2分鐘就干掉20%的EGFRvIII）。而使用trypLE就不會有這種現象，相應地，流式數據提示僅丟失5%不到的信號。所以遇到比較脆的細胞，比如干細胞和一些腫瘤PDC，要測試一下何種消化液可用。

2、明白每一種細胞對營養物質的需求。我看過無數protocol使用PBS做細胞重懸、染色等活細胞實驗的緩沖液。短時間的話，這并沒有什么問題。但是，經典的PBS配方中并不含葡萄糖、氨基酸等營養物質。因此，細胞在PBS中待的時間長的話，活性會受到極大的影響。我曾經做過一個實驗，分別用PBS和HBSS（后者含葡萄糖）重懸同一份細胞樣品，上流式進行單細胞分選到96孔板。最后，HBSS組超過50%的孔長出克隆，而PBS組則低于5%。對于一些非常敏感的細胞來說，比如神經元，連洗滌都要使用含糖及其他營養物質的buffer。