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  • 發布時間:2022-05-24 15:08 原文鏈接: 如何看免疫沉淀的結果圖

    圖a中,每個基因都在3'末端添加了一個V5標簽,正常表達后,其產物蛋白的C末端都會攜帶一段V5標簽(9個或14個氨基酸,通常不影響蛋白功能),那么這樣一來,只要用抗V5標簽的抗體檢測到了目標蛋白,那么就可以說明這個轉入的基因表達了。
    圖b中,左邊是3個基因在成纖維細胞中的表達情況,左側的數字為蛋白電泳后的大小位置(Kd)。我們知道,細胞里面的總蛋白經過電泳后,分子量越小的就會跑得越快,位置越靠近下面;而分子量越大的就跑得越慢,位置越靠近上面。用抗V5標簽的抗體孵育電泳結果并顯影后,攜帶V5標簽的基因的產物就會在相應的位置產生黑色條帶。由于從圖a上來看,基因1、2、3的長短關系為1>3>2,那么其產物的理論大小關系就為1>3>2。左圖成纖維細胞里面3個基因的表達恰好與理論結果一致,說明3個基因全部正常表達,并且不存在外顯子剪切的情況。右邊肌肉細胞中,轉入基因2和基因3與成纖維細胞是一致的,但轉入基因1的表達產物的大小卻與基因3一致,說明基因1在肌肉細胞中轉錄后2號外顯子隨著內含子剪切而被剪切掉了。
    這個實驗一定程度上支持了真核生物的基因是斷裂基因的結論,也說明了同一個基因的轉錄后修飾(外顯子剪接)在不同的細胞和組織里可能會有差異,進而形成不同的轉錄本,翻譯出功能不同的蛋白質。

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