如何選擇高校液相色譜柱

     現代液相色譜中，分離效果好壞的一個重要指標是色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬，因此，要做合適的選擇，必須對此有一定的認識和了解。當然，像藥典專用液相柱、中藥材專用分析柱、益母草專用柱、利巴韋林專用柱、甘露醇專用柱、益母草專用柱、氨基酸專用柱、檳榔專用柱、乳糖專用柱、人參專用柱、麻黃專用柱、木犀草苷分析柱、葡甲胺專用柱、人血白蛋白專用柱、肝素鈉專用柱、國達色譜柱、硫酸軟骨素專用柱、頭孢他啶專用柱、苯海拉明專用柱、藥典專用柱、苦參堿專用柱、抗體專用柱、頭孢聚合物專用體積排阻柱、石英毛細管柱等一些專用柱可以另作思考。

1、  硅膠基質填料

正相色譜 爭相色譜用的固定相通常為硅膠以及其他具有極性官能團的鍵合相填料，如NH2 APS CN和CPS.由于硅膠表面的硅羥基或其他極性基團極性較強。因此，分離的次序是依據樣品中各組分的極性大小，即極性較弱的祖墳zui先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如正己烷，氯仿，二氯甲烷等。

反相色譜

反相色譜用填料經常是以硅膠為基質，表面鍵合有極性相對較弱官能團的鍵合相。反相色譜所使用的流動相極性較強，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出的順序是極性較強的組分zui先被沖洗出，而極性弱的組分會再色譜上有更強的保留。通常的反相填料有C18，C8，C4等。

2、  聚合物填料

聚合物填料多為聚苯乙烯，二乙烯基苯共聚物或聚甲基丙烯酸酯等，其主要優點是在pH值在1-14條件下均可使用，相對于硅膠基質的C18填料，這類填料具有更強的疏水性；大孔的聚合物對蛋白質等樣品的分離非常有效。現有聚合物填料的缺點是相比硅膠基質填料色譜柱效較低。

3、  其他無機填料

其他HPLC的無機填料色譜柱也已經商品化，由于其特殊的性質，一般于特殊的用途。如，石墨化碳黑正逐漸成為反向色譜柱填料。這種填料的分離不同與硅膠基質烷基鍵合相，石墨化碳黑的表面即是保留的寄出，不再需其他的表面改性。該柱填料一般比烷基鍵合相硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強。石墨化碳黑可以用于分離某些幾何異構體，由于HPLC流動相中不會被溶解，這類柱可在任何pH與溫度下使用。氧化鋁也可以用于HPLC。氧化鋁微粒剛性強，應用范圍受到一定限制，所以未能廣泛應用。新型色譜氧化鋯質填料也可以用于HPLC，商品化的只有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應用pH1-14,溫度可達100℃，由于氧化鋯填料是zui近幾年才開始研究，加之而臨的實驗難度，其重要用途與優勢尚在開發中。

4、 怎樣選擇填料粒度

目前，商品化的色譜填料粒度從1um到超過30um均有銷售，而分析分離主要用3-5um填料，填料的粒度主要影響填充柱的兩個參數，即柱效和背壓，粒度越小，柱壓越大，柱壓的增加限制了粒度小于3um的填料應用。在相同選擇性條件下，提高柱效可提高分離度，但不是*的因素，如果固定相選擇正確，只是分離度不夠，那么選用更小的粒度的填料是很有用的，3un填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%，然而，3um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍，與此同時，柱效提高意味著在相同條件下可以選用更短的色譜柱，即相同的塔板數或分離能力，但是柱長縮短，分析時間縮短。另外，可以采用低粘度的溶劑做流動相或增加色譜柱的使用溫度，比如用乙腈代替甲醇以降低色譜柱的壓力。