⑴硫胺素負荷試驗：口服5mg或肌注1mg維生素B1，留4小時尿，測排出硫胺素的量，正常在100ug以上，腳氣病患者則低于50ug，甚至為零。
⑵測血液中丙酮酸和乳酸含量，腳氣病患者皆明顯升高，有助確診。且大多數病例二氧化碳結合力降低明顯。
⑶測定紅細胞的酮基移換酶活性。腳氣病患者該酶活性顯著減低。
上述試驗中以后二種結果更為可信，因可從硫胺素缺乏導致的代謝紊亂狀況估計實際硫胺素缺乏的程度，而負荷試驗僅反映硫胺素攝取后的即刻水平，而不反映硫胺素在組織中的存儲及分布，更不能表達硫胺素缺乏所致的生化改變。
在沒有條件作實驗診斷的情況下，對可疑病例給予維生素B1作診斷性治療，也是安全而可靠的方法。