嬰幼兒奶粉雙氰胺檢測默克色譜柱快速解決方案

　　ZIC?-HILIC色譜柱快速檢測嬰幼兒奶粉中雙氰胺

　　默克密理博應用實驗室 2013-01-29

　　1 前言

　　2013 年1 月，新西蘭牛奶及奶制品被檢測出含有低含量的有毒物質雙氰胺(二氰二氨Dicyanodiamide，DCD)，已經下令禁售含有DCD的奶制品。中國的進口奶粉八成來自新西蘭，全球60%以上的奶源產自新西蘭。新西蘭奶農通常會在牧草上噴灑雙氰胺，防止肥料中的副產品硝酸鹽流入河流和湖泊。

雙氰胺

　　目前，還沒有相應的食品含量標準和檢測標準。默克密理博致力于分析方法的開發，為客戶提供簡便、快速的解決方案。雙氰胺極性較強，易溶于水，中性及酸性條件下易電離，適合使用默克密理博的兩性離子型親水作用(ZIC?-HILIC)色譜柱分離。同時，雙氰胺在218nm下有強紫外吸收，可以采用ZIC?- HILIC 色譜柱在HPLC-UV條件進行快速分析，亦可在LC-MS/MS進行痕量檢測。

　　2 儀器及試劑

　　2.1 儀器設備

　　2.1.1 色譜柱：ZIC?-HILIC, PEEK HPLC Column 250 x 4.6 mm, 5 μm, 200 ?(1.50458.0001)

　　2.1.2 HPLC：Agilent 1260HPLC(DAD檢測器)

　　2.1.3 單道移液器Transferpette?S，Digital adjustable 500-5000ul(Brand：BR704782)

　　2.1.4微孔濾膜:0.45um,PTFE(Millipore：SLFHX13NL)

　　2.1.5純水系統:Milli-Q3(Millipore)

　　2.1 儀器設備

　　2.1.1 色譜柱：ZIC?-HILIC, PEEK HPLC Column 250 x 4.6 mm, 5 μm, 200 ?(1.50458.0001)

　　2.1.2 HPLC：Agilent 1260HPLC(DAD檢測器)

　　2.1.3 單道移液器Transferpette?S，Digital adjustable 500-5000ul(Brand：BR704782)

　　2.1.4微孔濾膜:0.45um,PTFE(Millipore：SLFHX13NL)

　　2.1.5純水系統:Milli-Q3(Millipore)

　　2.2 試劑

　　2.2.1色譜乙腈:LichroSolv?Acetonitrile Gradient Grade(1.00030.4008)

　　2.2.2乙酸銨：Ammonium acetate for analysis EMSURE? ACS,Reag. Ph Eur(1.01116.1000)

　　2.2.3甲酸：Formic acid 98-100% for analysis EMSURE? ACS,Reag. Ph Eur(1.00264.1000)

　　2.2.4 2%甲酸溶液：取20ml甲酸，加入1000ml超純水中

　　2.2.5 70/30乙腈-甲酸溶液：去700ml乙腈(2.2.1),與300ml 甲酸溶液(2.2.4)混合

　　3 實驗方法

　　3.1 樣品處理

　　方法1:

　　取嬰幼兒配方奶粉2g于50mL PP管中，加18mL 2%的甲酸水溶液，加蓋密閉。搖振60秒，再超聲30分鐘，取出，再搖振60秒，放入離心機中離心(4000轉)，20分鐘。取出，吸取上清液50ul，于10ml PP管中，加入950ul乙腈，加蓋密閉，振搖60秒，吸取溶液，過濾，即得供試液。

　　方法2：

　　取嬰幼兒配方奶粉2g于50mL PP管中，加20mL 乙腈-甲酸水溶液，加蓋密閉。搖振60秒，再超聲30分鐘，取出，再搖振60秒，靜置，吸取上層溶液，過濾，即得供試液。

　　加標樣品同法配制。

　　3.2 測試條件

　　3.2.1 色譜條件

　　流動相 (v/v): A-醋酸銨溶液(10 mM),B-乙腈

　　比例*：A:B=12：88

　　流速:1 mL/min

　　進樣量：20ul

　　*必要時設置如下方法對色譜柱進行再生和平衡：

　　3.3 測試結果

　　按照方法1處理，結果如下：

　　3.3.1 對照品圖譜

(DCD濃度1.25ug/ml)
雙氰胺保留時間4.98min,理論塔板數13086,拖尾因子1.2.

　　3.3.2 無檢出的奶粉空白

       3.3.3 奶粉加標

測試液中加入的標樣濃度:5ug/ml

測試液中加入的標樣濃度：0.05ug/ml.

　　3.3.4 某知名品牌奶粉

該品牌奶粉中未檢出雙氰胺.

　　4 結論

　　采用ZIC?-HILIC色譜柱，可用于雙氰胺的快速檢測。處理方法簡單，色譜峰型良好，方法重現性良好(RSD<2%),檢測濃度在 0.5-10ug/ml之間現行關系良好(R=0.999),加樣回收率在95.6-101.5%之間。按照方法1的處理，LOD為1.3ug/g奶粉，按照方法二處理,LOD可達0.07ug/g。

　　該色譜柱還能用于三聚氰胺、雙氰胺、三聚氰酸、二甲雙胍、尿素等的同時檢測，如：

　　另外，LC-MS/MS采用如下色譜條件：

　　色譜柱：ZIC?-HILIC (5 μm, 200?) PEEK 150x2.1 mm

　　流動相：A: 95:5 ACN:0.1% formic acid/10 mM ammonium formate in H2O

　　B: 50:50 ACN:0.1% formic acid/10 mM ammonium formate in H2O

梯度方法