【原理】
新生兒溶血病HDN發生的主要原因在于母子血型不合,血型系統最主要的類型為ABO血型系統,本實驗采用微柱凝膠檢測孕婦血清中的抗A(B)IgG抗體效價。
【試劑】
6%牛血清白蛋白;生理鹽水;凝膠卡
【標本采集】
孕婦靜脈血3毫升,肝素鈉抗凝,孕婦愛人靜脈血3毫升,肝素鈉抗凝。將孕婦標本制作成血清標本,孕婦愛人標本制成0.5%紅細胞標本(用生理鹽水洗滌后配制)。
【操作步驟】
1. 取孕婦血清標本50微升加入等體積的牛血清白蛋白,37度水浴溫育30~60分鐘;
2. 將血清倍比稀釋成9管,依次為1:4、8、16、32、64、128、512、1024、2048管;
3. 將卡作好標記,在所有孔中加入經處理好的孕婦血清標本50ul;
4. 然后在所有孔中加入50ul的孕婦愛人0.5%紅細胞標本;
5. 37度孵育15分鐘(專用孵育箱);
6. 專用離心機離心5分鐘;900rpm2分鐘,1500rpm3分鐘;
7. 取出判定結果;
【結果判定】
陽性結果:紅細胞凝集塊位于凝膠表面或凝膠中;
陰性結果:紅細胞完全沉降到膠底部,在凝膠管底部形成紅細胞扣。
【結果報告】
產生1+陽性凝集的最高稀釋度,其倒數即為效價。
【注意事項】
1. 紅細胞標本一定不能被細菌污染,否則出現假陽性反應,盡可能應用當日采集的新鮮血做本實驗。如不得不用過夜血或陳舊血,則必須首先用該標本做陰性對照試驗,以確定該標本是否可以做本試驗。
2. 血清標本:血清標本必須充分去除纖維蛋白,否則標本中纖維蛋白在微柱凝膠中析出,阻礙紅細胞沉淀,呈假陽性反應。
3. 如在微柱凝膠中出現溶血現象,強烈提示為紅細胞抗原抗體陽性反應,也不排除其他原因所臻溶血,故對此標本一定認真分析,并向上級主管技術人員報告并討論。
4. 本凝膠卡價格不菲,成本較高,請您節約使用。
【臨床意義】
有人觀察1632例孕婦血清中IgG抗A(B)≥1:64者249例;ABO-HDN發生率隨IgG抗A(B)效價升高而上升;HDN與妊娠史的頻率有關,隨著年齡上升,孕婦個體IgG抗A(B)抗體效價也隨之上升。夫婦間ABO血型不合者應及時檢查產前血型抗體水平,用于預防不良妊娠的發生;IgG抗A(B)效價的高低與HDN的發病率成正比;孕婦血清IgG抗A(B)效價≥1:64需定期檢測抗體效價水平及時用藥降低抗體效價,以預防新生兒溶血病的發生。