實時定量pcr擴增曲線怎么分析

Green的雙delta
Ct法要求目的基因和內參的擴增效率基本一致。如果不一致，需要對公式進行修正，部分qPCR儀的配套軟件可以做到，直接輸入每對引物的擴增效率。但無論如何，保證高擴增效率是實驗成功的關鍵。如果擴增效率一致，不同Ct的曲線顯示出來就基本是平行的位移，其傾斜程度基本一致。而如下圖一樣，一條比較“陡”，另一條比較“平”，那么意味著擴增效率不一致。有可能是引物效率不一，或者個別樣品、反應孔存在抑制PCR的污染等。