實時熒光定量PCR儀采購要領！

　　 目前購買熒光定量PCR儀系統，一般包括：

　　 實時熒光定量PCR儀 +實時熒光定量PCR儀 開機檢測試劑+通用電腦+自動分析軟件

　　 熒光定量PCR儀 組成：溫控模塊、光學系統（光源、檢測器、光路傳導）

　　采購要領

　　 1 溫控模塊/Peltier：

　　 普通的Peltier加熱方式具有明顯邊緣效應，均一性差，是上一代的模塊PCR加熱技術，正處于被淘汰的邊緣。

　　 目前最好的溫控模塊：銀，在金屬中銀的導熱性能較高，升降溫速度快，孔間溫度均一性好，邊緣效應相應減少

　　 金屬的熱傳導系數表：

　　 銀 429 ＞銅 401 ＞ 金 317 ＞鋁 237 ＞鐵 80 ＞錫 67 ＞ 鉛 34.8

　　另：

　　 單一模塊升降溫速度高并不代表樣本升降溫速度也高，因此在溫控模塊升降溫速度對比中，最終是要看樣本的升降溫速度是否快

　　 最大升降溫速度不等與平均升降溫速度

　　 2 光源：

　　 光強比較：髙強度白光LED ＞ 鹵鎢燈 ＞單色LED

　　 白光LED的亮度約是鹵鎢燈的3倍左右，單色LED的10倍左右，能夠捕捉到更多的熒光信號，是專業光源領域的最新技術代表，2011年開始普遍應用于專業儀器，無論光強、靈敏度與均一性可與上一代氙燈光源媲美，且壽命提升了10倍以上。

　　鎢燈燈絲本身存在閃爍不穩定的問題，其激發能量遠低于白光LED，事實上，無需高端品牌汽車的旗艦概念車，如豐田雷克薩斯，已經開始使用白光LED作為車頭燈。

　　 壽命比較：髙強度白光LED = 單色LED ＞鹵鎢燈

　　 白光LED的壽命長達10000小時以上，一般可以使用5-10年左右，基本上超過了一般科研儀器的正常工作壽命，基本終身無需更換光源，而鹵鎢燈光源基本每2年就要更換一次，費時費力，南方更是不足一年就要更換一次

　　另：

　　鹵鎢燈每次運行需要半小時預熱，其中累計散發的熱量對熒光具有明顯的淬滅作用。

　　 3 檢測器：

　　 熒光定量PCR靈敏度：冷CCD ＞CCD ＞光電倍增管 CPM ＞光電二極管

　　 CCD作為熒光信號的接受器，其質量直接決定了儀器的檢測靈敏度和穩定性。

　　10℃的冷CCD，和常溫CCD有著質的區別，在專業光學領域，冷CCD的造價成本至少要比常規CCD高出一倍以上。冷CCD在更低的溫度下進行光信號捕捉，能夠提供更高的光感靈敏度和更低背景噪音。因此，有的熒光定量PCR能夠穩定區分1000和2000拷貝的濃度差異，而有的只能做到區分5000和10000個拷貝數。

　　 4 光路傳導：：

　　 光路的傳導 光路設計應盡可能有效消除邊緣效應，光路設計是否有效消除邊緣效應，只有實驗才能檢驗

　　 檢驗方法：96/384孔板中及四角各布置標準品，看差異

　　 其中

　　 a 光源直接照射微孔板上：邊緣效應明顯

　　 b 逐孔移動式采光：無邊緣效應，但需時常校正

　　 c 散射采光：邊緣效應較明顯，切換光源時需要光源組件移動