如果有標準曲線,按照標準曲線計算。
一般都是相對量,則用delta delta CT方法來計算。舉例如下:對照組基因A的CT值為20, 內參:比如βactin)CT值15。實驗組基因A CT值18,內參CT值14。
如果是realtime做表達量,用excel的制圖,將每個個體的Ct值平均數做出柱狀圖就可以了。如你還做了標曲,就用制圖中的散點圖看R2值。其實這些功能做定量PCR的時候電腦程序應該會自動分析才對,具體情況具體分析。
技術原理
將標記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后,完成高溫變性,低溫復性,適溫延伸的熱循環,并遵守聚合酶鏈反應規律,與模板DNA互補配對的Taqman探針被切斷,熒光素游離于反應體系中,在特定光激發下發出熒光,隨著循環次數的增加,被擴增的目的基因片段呈指數規律增長,通過實時檢測與之對應的隨擴增而變化熒光信號強度,求得Ct值,同時利用數個已知模板濃度的標準品作對照,即可得出待測標本目的基因的拷貝數。