1. 總RNA的提取：見相關內容。
2. cDNA第一鏈的合成：試劑公司有多種cDNA第一鏈試劑盒出售，其原理基本相同，但操作步驟不一。現以GIBICOL公司提供的SuperScript Preamplification System for First Strand cDNA Synthesis 試劑盒為例。
（1）在0.5ml微量離心管中，加入總RNA 1-5μg，補充適量的DEPC H2O使總體積達11μl。在管中加10μM Oligo（dT）12-18 1μl，輕輕混勻、離心。
（2）70℃加熱10min，立即將微量離心管插入冰浴中至少1min。
然后加入下列試劑的混合物：
10×PCR buffer 2μl
25mM MgCl2 2μl
10mM dNTPmix 1μl
0.1M DTT 2μl
輕輕混勻，離心。42℃孵育2-5min。
（3）加入SuperscriptⅡ1μl ，在42℃水浴中孵育50min。
（4）于70℃加熱15min以終止反應。
（5）將管插入冰中，加入RNase H 1μl ，37℃孵育20min，降解殘留的RNA。-20℃保存備用。
3．PCR：
（1）取0.5ml PCR管，依次加入下列試劑：
第一鏈cDNA 2μl
上游引物（10pM） 2μl
下游引物（10pM） 2μl
dNTP(2mM) 4μl
10×PCR buffer 5μl
Taq 酶（2u/μl） 1μl
（2） 加入適量的ddH2O，使總體積達50μl。輕輕混勻，離心。
（3） 設定PCR程序。在適當的溫度參數下擴增28-32個循環。為了保證實驗結果的可靠與準確，可在PCR擴增目的基因時，加入一對內參（如G3PD）的特異性引物，同時擴增內參DNA，作為對照。
（4） 電泳鑒定：行瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下觀察結果。
（5） 密度掃描、結果分析：采用凝膠圖像分析系統，對電泳條帶進行密度掃描。