做多肽藥物時遇到下列問題:1)基線不穩定波動大,流動相 A :1%TFA 水溶液 B:1%TFA 乙腈溶液檢測波長 210nm 流速 1.0ml/ml 什么原因?怎么解決?TFA 有什么作用?流動相中不加 TFA 見不到主峰,基線良好。2)做完肽類樣品時怎么沖洗 C18 比較好;3)藥典上介紹測定分子量大于 2000 的樣品,選擇柱子填料的孔徑為 30nm,30nm 與 10nm 對結果有什么區別?
答:應該是起 “離子對” 的作用吧。在做多肽類樣品的時候,300A 孔徑的填料相對 100A 孔徑肯定要選擇性好點,也就是分離度相對比較好點。流動相加入 TFA,在反相色譜分離多肽和蛋白質的實驗中,使用三氟乙酸(TFA) 作為離子對試劑是常見的手段。流動相中的三氟乙酸通過與疏水鍵合相和殘留的極性表面以多種模式相互作用,來改善峰形、克服峰展寬和拖尾問題。
三氟乙酸優于其他離子修飾劑的原因是它容易揮發,可以方便地從制備樣品中除去。另一方面,三氟乙酸的紫外最大吸收峰低于 200nm ,對多肽在低波長處的檢測干擾很小。