酰化能降低羥基、氨基、巰基的極性,改善這些化合物的色譜性能,并提高這些化合物的揮發性,增加某些易氧化化合物的穩定性。當酰化時引入含有鹵離子的酰基時,還可以提高使用ECD檢測器的靈敏度。常用的酰化試劑有酰鹵、酸酐和反應活性的酰化物。
(1)乙酰化法:標準乙酰化法是將樣品溶于氯仿中,與乙酸酐和乙酸在50℃反應2-6h,真空出去剩余試劑。還可以乙酸鈉為堿性催化劑,以乙酸酐為乙酰化試劑進行乙酰化反應,用于糖類分析。吡啶、三甲胺、甲基咪唑也可以作為堿性催化劑。乙酰化反應通常在非水介質中進行,但是胺類和酚類化合物乙酰化時可在水溶液中進行。
(2)多氟酰化法:常用的多氟化試劑是三氟乙酰(TFA)、五氟丙酰(PFP)和七氟丁酰(HFB),其活性是TFA>PFP>HFB。TFA和PFP的衍生物揮發性較強,而HFB的衍生物ECD靈敏度較高。多氟酰化反應時間除了取決于多氟酰化試劑的活性,還取決于目標化合物的活性。多數情況下氟酰化反應不需溶劑,但有些情況下也是需要溶劑的,此外有時還需要加堿性催化劑。