高效液相色譜擁有眾多分離模式,建立液相色譜分離方法的第一步即是根據樣品種類選擇合適的分離模式。理論上,任何一種化合物的性質都可以構建相應的分離模式。圖1所示為一個蛋白質分子。根據其分子量、帯電性質、生物活性、溶解性能等性質,可以分別構建凝膠色譜、離子交換、親和色譜、反相色譜等分離模式,用于其與其他化合物的分離
一、分離模式的選擇
樣品的性質不同、分離的目的不同,所選擇的分離模式和所發展的對應的分析方法也不同。圖2給出了基于樣品的一般性質選擇分離模式的基本原則。
圖1 蛋白質分子的性質
圖2 基于樣品的一般性質選擇分離模式的基本原則
二、洗脫溶劑的特征
高效液相色譜中,不同分離模式通常需要選擇相應的洗脫溶劑。當以溶劑作為質子給予體、接受體以及其偶極相互作用強度組成一個三角形坐標時,可發現選擇性相似的溶劑分布在三角形平面中的一定區域內,從而構成選擇性不同的溶劑分組。圖3為溶劑選擇性分組的三角形坐標,表1也列出了依據溶劑選擇性分組的各種有機化合物的類型。
由表1可知,常用溶劑可分為8個選擇性不同的特征組,處于同一組中的溶劑具有相似的特性。因此對某一指定的分離,若某種溶劑不能給出良好的分離選擇性,就可用另一種其他組的溶劑來替代,從而可明顯地改善分離選擇性。
圖3 溶劑選擇性分組的三角形坐標
表1 溶劑選擇性分組
組別 | 溶劑名稱 |
Ⅰ | 脂肪族醚、三級烷胺、四甲基胍、六甲基磷酰胺 |
Ⅱ | 脂肪醇 |
Ⅲ | 吡啶衍生物、四氫呋喃、酰胺(除甲酰胺外)、乙二醇醚、亞砜 |
Ⅳ | 乙二醇、苯甲醇、甲酰胺、乙酸 |
Ⅴ | 二氯甲烷、二氯乙烷 |
Ⅵa | 磷酸三甲苯酯、脂肪族酮和酯、聚醚、二氧六環 |
Ⅵb | 腈、砜、碳酸丙烯酯 |
Ⅶ | 硝基化合物、芳香醚、芳烴、鹵代芳烴 |
Ⅷ | 氟烷醇、間甲苯酚、氯仿、水 |